基于化學(xué)物質(zhì)基礎(chǔ)和代謝組學(xué)方法的中藥藜蘆毒性及藜蘆與人參配伍禁忌機(jī)制研究.pdf

1、藜蘆(VeratrumnigrumL.)為具有多種功效的少常用中藥，其中甾體生物堿類成分具有較強(qiáng)的毒性。本研究以中藥藥性理論及中藥配伍禁忌理論為指導(dǎo)，以毒性藥材藜蘆為研究對象，嘗試揭示藜蘆的毒性作用及藜蘆與人參的配伍禁忌機(jī)制。綜合應(yīng)用現(xiàn)代大型分析儀器，從化學(xué)成分、入血成分兩方面對藜蘆藥材的化學(xué)物質(zhì)基礎(chǔ)進(jìn)行研究。在此基礎(chǔ)上，基于代謝組學(xué)方法全面評價(jià)藜蘆藥材對生物體代謝環(huán)境的影響，對藜蘆藥材的整體毒性進(jìn)行研究。同時(shí)應(yīng)用血清藥理學(xué)方法對藜蘆藥

2、材給藥血清對肝臟及腎臟原代細(xì)胞的影響進(jìn)行了探索性實(shí)驗(yàn)，為代謝組學(xué)評價(jià)藜蘆毒性提供了參照。本研究為毒性藥材藜蘆的安全用藥提供指導(dǎo)，也為使用代謝組學(xué)方法進(jìn)行復(fù)雜中藥體系相互作用研究提供借鑒。具體研究內(nèi)容如下：
　　 1.藜蘆藥材的化學(xué)物質(zhì)基礎(chǔ)研究
　　 我們采用超高效液相色譜-飛行時(shí)間質(zhì)譜(UHPLC-Q-TOF/MS)聯(lián)用技術(shù)對藜蘆藥材的化學(xué)成分進(jìn)行了鑒別，并解析了其中的三組同分異構(gòu)體，其色譜質(zhì)譜條件為：采用Agilent

3、EclipsePlusC18(2.1mm×100mm，1.8μm)色譜柱，流動相采用乙腈-0.1％甲酸溶液，柱溫40℃，流速為0.35ml/min。離子源為ESI源，正離子模式，質(zhì)譜掃描范圍m/z100-1100,毛細(xì)管電壓4000V，干燥氣流速11L/min，干燥氣溫度350℃；霧化氣壓力50Psig，碎片電壓150V。在17min內(nèi)共鑒別出32個化學(xué)成分，從中我們發(fā)現(xiàn)了三組同分異構(gòu)體，質(zhì)荷比分別為414，674，412。通過UHPL

4、C-Q-TOF/MS技術(shù)對這三組同分異構(gòu)體進(jìn)一步進(jìn)行MS/MS分析，碰撞能量為45V，推測其可能的裂解途徑，最終確定了這三組同分異構(gòu)體。
　　 在對藜蘆藥材化學(xué)成分分析鑒別的基礎(chǔ)上，我們通過給SD大鼠灌胃給藥藜蘆提取物，采用UHPLC-Q-TOF/MS技術(shù)對比體外藜蘆藥材化學(xué)成分峰，對大鼠血漿中的成分進(jìn)行分析鑒別，共成功鑒別出大鼠血漿中11個甾體生物堿類原型成分。
　　 2.代謝組學(xué)和血清藥理學(xué)方法對藜蘆藥材毒性的研究<

5、br>　　 本實(shí)驗(yàn)采用1HNMR技術(shù)對藜蘆組的SD雄性大鼠尿液進(jìn)行代謝組學(xué)研究。連續(xù)給大鼠灌胃藜蘆藥材提取液，采集不同時(shí)間點(diǎn)的尿液，分析大鼠體內(nèi)的內(nèi)源性代謝物組變化軌跡，篩選藜蘆毒性作用的潛在生物標(biāo)志物。通過對大鼠給藥一周后不同時(shí)間尿液的代謝組學(xué)研究，來評價(jià)藜蘆的整體毒性，為進(jìn)一步了解其作用機(jī)制提供依據(jù)。此外，本文將血清藥理學(xué)方法應(yīng)用于藜蘆藥材毒性的研究，從細(xì)胞分子水平來闡述中藥藜蘆的毒性作用。初步證實(shí)了藜蘆具有一定肝臟和腎臟毒性。<