干預(yù)CD137-CD137L軸對(duì)ApoE-1-小鼠NFATcl表達(dá)的影響.pdf

1、目的:
　　 本研究觀察在載脂蛋白E基因敲除(ApoE-/-)小鼠動(dòng)脈粥樣硬化(AS)模型中,檢測(cè)小鼠活化T細(xì)胞核因子Cl(NFATcl)及血脂表達(dá)水平的變化,并探討CD137-CD137L相互作用對(duì)ApoE-/-小鼠NFATcl表達(dá)的影響及相關(guān)機(jī)制。
　　 方法:
　　 采用ApoE-/-鼠頸動(dòng)脈硅膠圈植入法快速制作AS模型,蘇木精-伊紅(HE)染色,用于病理圖像形態(tài)學(xué)分析。免疫組織化學(xué)法分析頸動(dòng)脈AS斑塊中N

2、FATc1表達(dá),RT-PCR和WesternBlot及流式細(xì)胞術(shù)方法分別檢測(cè)小鼠脾臟淋巴細(xì)胞中NFATc1蛋白和mRNA的表達(dá)。
　　 結(jié)果:
　　 (1)與正常對(duì)照組相比,干預(yù)組小鼠血清TG、LDL-C、TC顯著升高,HDL-C則顯著降低。
　　 (2)正常對(duì)照組血管內(nèi)膜沒有明顯脂質(zhì)、膽固醇及粥樣斑塊形成,血管內(nèi)膜平整光滑,管壁均勻呈半透明狀。術(shù)后ApoE-/-模型鼠血管內(nèi)膜可見膽固醇結(jié)晶,有明顯脂質(zhì)及斑塊形成

3、,內(nèi)含大量泡沫細(xì)胞,彈力板變性甚至斷裂,而術(shù)后給予anti-CD137刺激劑后斑塊更顯著,術(shù)后給予anti-CD137L抑制劑后斑塊較正常對(duì)照組減少。
　　 (3)正常對(duì)照組頸動(dòng)脈內(nèi)NFATc1不表達(dá),手術(shù)組ApoE-/-小鼠頸動(dòng)脈斑塊可見NFATc1表達(dá),而術(shù)后體內(nèi)給予anti-CD137刺激CD137-CD137L軸后,免疫組化顯示ApoE-/-小鼠頸動(dòng)脈AS斑塊中NFATc1表達(dá)明顯增強(qiáng),同時(shí)應(yīng)用anti-CD137L抑制

4、該軸后,ApoE-/-小鼠頸動(dòng)脈AS斑塊中NFATc1表達(dá)顯著減弱。
　　 (4)體內(nèi)腹腔注射anti-CD137特異性刺激CD137-CD137L軸后,脾臟淋巴細(xì)胞中NFATcl表達(dá)增加;而腹腔注射anti-CD137L特異性阻斷CD137-CD137L軸后,脾臟淋巴細(xì)胞中NFATc1表達(dá)減少。
　　 (5)體外培養(yǎng)的脾臟淋巴細(xì)胞中anti-CD137刺激CD137-CD137L軸后,淋巴細(xì)胞NFATc1mRNA和蛋白

5、表達(dá)明顯上調(diào),刺激濃度以20μg/mL時(shí)作用最強(qiáng),刺激時(shí)間24h最佳。Anti-CD137L特異性抑制CD137-CD137L軸能明顯降低NFATc1mRNA及蛋白表達(dá),濃度以20μg/mL時(shí)抑制作用最強(qiáng),抑制時(shí)間24h最佳。
　　 結(jié)論:
　　 (1)CD137-CD137L在動(dòng)脈粥樣硬化的形成、發(fā)展中發(fā)揮著重要作用。
　　 (2)CD137-CD137L相互作用能調(diào)控ApoE-/-小鼠NFATc1的表達(dá)。NF