抗CD137L單克隆抗體對(duì)系統(tǒng)性紅斑狼瘡鼠免疫干預(yù)的研究.pdf

1、目的：通過研究Pristane誘導(dǎo)的系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)模型鼠淋巴細(xì)胞表面共刺激信號(hào)的變化，進(jìn)而探討體內(nèi)阻斷CD137/CD137L共刺激信號(hào)對(duì)SLE模型鼠疾病變化的影響。
　　方法：1.建立狼瘡鼠模型，雌性6-8周齡BALB/c鼠單次腹腔注射Pristane0.5ml，對(duì)照組BALB/c鼠注射PBS0.5ml。2.四溴酚藍(lán)指示劑法檢測(cè)BALB/c鼠尿蛋白含量、ELISA法檢測(cè)BALB/c鼠外周血自身抗體（抗ds-DNA、抗S

2、m/RNP）含量、HE染色評(píng)估BALB/c鼠病理學(xué)損傷，對(duì)狼瘡鼠模型進(jìn)行鑒定。3.分離對(duì)照組和模型組小鼠外周血和脾臟淋巴細(xì)胞，采用流式細(xì)胞術(shù)（FCM）雙標(biāo)記法檢測(cè)T細(xì)胞表面CD28、CD40L、CD137和B細(xì)胞表面CD40、CD137L分子的表達(dá)變化。4.免疫組化檢測(cè)對(duì)照組和模型組小鼠肺組織共刺激分子CD28、CD40L、CD137的表達(dá)。5.半定量RT-PCR檢測(cè)小鼠脾臟組織中細(xì)胞因子TNF-α、IFN-γmRNA水平。6.運(yùn)用抗C

3、D137L單克隆抗體進(jìn)行體內(nèi)免疫干預(yù)：Pristane注射三個(gè)月后，小鼠隨機(jī)分為四組，分別尾靜脈注射抗CD137L單克隆抗體0、10、50、100ug，PBS注射組小鼠注射適量生理鹽水。每周1次，共計(jì)3次。7.不同劑量干預(yù)組小鼠與對(duì)照組小鼠生物學(xué)鑒定及病理學(xué)檢查：尿蛋白試紙法檢測(cè)尿蛋白含量、ELISA法檢測(cè)外周血自身抗體（抗ds-DNA、抗Sm/RNP）含量、HE染色評(píng)估病理學(xué)損傷。8.熒光定量PCR檢測(cè)不同劑量干預(yù)組小鼠與對(duì)照組小鼠脾

4、臟組織中細(xì)胞因子TNF-α、IFN-γmRNA水平。
　　結(jié)果：1. Pristane成功誘導(dǎo)SLE小鼠模型：?模型組小鼠1個(gè)月時(shí)開始出現(xiàn)蛋白尿，且隨月份增加蛋白尿陽性率逐漸升高；對(duì)照組小鼠尿蛋白基本為陰性。?模型組小鼠血清抗Sm/RNP抗體和抗ds-DNA抗體分別于第三、四個(gè)月時(shí)明顯高于對(duì)照組，并維持高水平狀態(tài)至處死；對(duì)照組小鼠基本保持不變。?模型組小鼠出現(xiàn)關(guān)節(jié)腫脹和面部―紅斑‖；對(duì)照組小鼠無異常改變。④HE染色，模型組小鼠肺、

5、肝臟和腎臟出現(xiàn)不同程度的病理學(xué)改變。2.流式結(jié)果顯示，模型組小鼠外周血T細(xì)胞表面共刺激分子CD28一個(gè)月時(shí)表達(dá)升高后逐漸下降至低于正常對(duì)照組（P<0.01）；T細(xì)胞表面CD40L的表達(dá)變化無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），B細(xì)胞表面共刺激分子CD40三個(gè)月時(shí)表達(dá)升高，六個(gè)月時(shí)表達(dá)下降至低于正常對(duì)照組（P<0.05）；共刺激分子CD137、CD137L三個(gè)月時(shí)表達(dá)增高并維持高表達(dá)狀態(tài)至處死（P<0.05）。對(duì)照組小鼠外周血淋巴細(xì)胞表面共刺激分

6、子表達(dá)變化無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。小鼠脾臟淋巴細(xì)胞表面共刺激分子CD28、CD40L/CD40和CD137/CD137L的表達(dá)變化與外周血基本一致。3.免疫組化結(jié)果顯示，共刺激分子CD28、CD40L和CD137在模型組小鼠肺組織細(xì)胞中表達(dá)陽性，但在對(duì)照組小鼠肺組織基本無表達(dá)。4.RT-PCR結(jié)果顯示，與對(duì)照組相比模型組小鼠脾臟組織中細(xì)胞因子TNF-α、IFN-γ mRNA水平升高。5.抗CD137L單克隆抗體干預(yù)后，狼瘡鼠的部分