肝X受體改善脂肪組織胰島素抵抗機制的研究.pdf

1、目的：
　　肝X受體是核受體超家族中的一員，對維持膽固醇穩(wěn)態(tài)，調(diào)節(jié)糖脂代謝都有重要作用。在本次研究中，我們觀察了小鼠脂肪組織和3T3-L1脂肪細胞中LXR激動劑TO901317在基礎狀態(tài)及胰島素抵抗狀態(tài)下對糖代謝的影響，并進一步探討了其改善胰島素抵抗的分子機制。
　　方法：
　?。?）選用雄性db/db和C57BL/6小鼠為研究對象，隨機分為db/db對照組（db/db Con）和db/db TO901317組（db/

2、db TO）；C57 Con組和C57 TO組，每組入組9只。db/db Con和C57 Con組每日腹腔注射DMSO(10％DMSO250ul)，db/db TO和C57 TO組每日腹腔注射LXR激動劑TO901317（30mg/kg），共用藥14天。測定小鼠體重，空腹血糖（FBG）、空腹胰島素（Fins）和游離脂肪酸（FFA）及行腹腔胰島素耐量試驗（ITT）。
　?。?）小鼠處死后取附睪脂肪組織，實時定量-聚合酶鏈反應（Rea

3、l-time PCR）的方法測定各組小鼠脂肪組織內(nèi)己糖激酶（HK）、葡萄糖轉(zhuǎn)運體-4（GLUT4）mRNA的變化；應用免疫印跡法觀察小鼠脂肪組織內(nèi)蛋白激酶B（Akt）磷酸化水平的改變。選取3T3-L1脂肪細胞，用棕櫚酸（Palmitate，PA）誘導成胰島素抵抗的細胞模型，再觀察TO901317對葡萄糖轉(zhuǎn)運的作用。應用Real-time PCR的方法測定成模后單獨及與TO901317聯(lián)合應用3T3-L1脂肪細胞內(nèi)HK、GLUT4 mRN

4、A的表達變化及應用免疫印跡法觀察TO901317對存在胰島素抵抗的3T3-L1細胞內(nèi)Akt蛋白磷酸化水平的改變。
　?。?）應用免疫印跡法觀察TO901317活化LXR后，db/db、C57小鼠脂肪組織和胰島素抵抗的3T3-L1細胞模型中，c-jun氨基末端激酶（JNK）蛋白磷酸化水平的改變。
　　結果：
　?。?）與C57小鼠比較，db/db小鼠的體重、胰島素耐量試驗葡萄糖曲線下面積（AUC）、FFA、穩(wěn)態(tài)模型胰島素

5、分泌指數(shù)（HOMA-IS）顯著較高，P＜0.05；胰島素敏感指數(shù)（ISI）顯著較低，P＜0.05。與db/db Con小組相比，db/db TO組的AUC降低，HOMA-IS及ISI升高，P＜0.05；體重、血清FFA沒有明顯變化。與C57 Con組相比，C57 TO組AUC、HOMA-IS、ISI、體重、FFA均無明顯改變。
　?。?）動物實驗中Real-time PCR結果示db/db小鼠用藥后HK、GLUT4 mRNA表達量

6、上調(diào)，P＜0.05。C57用藥前后無明顯變化。Western blot結果顯示，與db/db Con組相比，db/db TO組小鼠的脂肪組織在Akt總蛋白不變的情況下，Akt蛋白的磷酸化水平升高。在細胞實驗中，應用PA誘導3T3-L1脂肪細胞后，出現(xiàn)Akt蛋白磷酸化水平降低，胰島素抵抗模型建成。TO901317與PA共同應用比單獨應用PA葡萄糖轉(zhuǎn)運量增高，P＜0.05。TO901317與PA共同孵育3T3-L1脂肪細胞逆轉(zhuǎn)了PA單獨應用

7、時所致的HK、GLUT4 mRNA的表達下調(diào)，P＜0.05。而TO901317單獨應用于正常3T3-L1脂肪細胞時僅上調(diào)了GLUT4 mRNA的表達量，P＜0.05，HK mRNA表達量無影響。Western blot結果顯示，與PA單獨孵育3T3-L1脂肪細胞相比，PA與TO901317共同孵育后3T3-L1脂肪細胞內(nèi)，Akt蛋白磷酸化水平升高而Akt總蛋白保持不變。
　?。?）動物實驗Western blot結果顯示，與db/

8、db Con組相比，db/db TO組小鼠的脂肪組織在JNK總蛋白不變的情況下，JNK蛋白磷酸化水平降低。與C57 Con組相比，C57 TO組小鼠脂肪組織JNK蛋白磷酸化及總蛋白水平均未出現(xiàn)改變。細胞實驗示：TO901317作用于3T3-L1胰島素抵抗細胞模型后JNK蛋白磷酸化水平明顯降低而總蛋白保持不變。
　　結論：
　　（1）在胰島素抵抗狀態(tài)下LXR活化后有顯著的降糖和增加胰島素敏感性的效應。在無胰島素抵抗狀態(tài)下，LX