siRNA沉默食管癌EC9706細胞中Livin表達的生物學效應初步分析.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、鄭州大學碩士學位論文siRNA沉默食管癌EC9706細胞中Livin表達的生物學效應初步分析姓名：郭斌申請學位級別：碩士專業(yè)：免疫學指導教師：陳宗德趙國強20070326鄭州大學2007屆碩士學位論文中文摘要和ClaI雙酶切siRNA表達載體pSUPERneo；將雙粘livina和livinl3發(fā)卡樣siRNA片段分別連接入siRNA表達載體pSUPERneo中；利用BamHI和ClaI雙酶切篩選鑒定重組子，并對重組子命名pSUPERn

2、eoSlil、pSUPERneoSli2和pSUPERncoC：對插入序列進行DNA序列分析。用脂質體包裹分別轉染沉默Livin表達的siRNA載體以及l(fā)ivina和livinlB表達載體入食管癌細胞EC9706。熒光定量RTPCR檢測LivinmRNA表達情況，測定細胞生長曲線和Caspase3活性，檢測細胞凋亡的影響。結果1通過篩選并通過同源序列檢索和進一步優(yōu)選，最后確定19個堿基為siRNA靶片咧：GcGTcTGGc(x℃crI℃

3、TAT(44m458)和GTcIGGccTc(HTcTATGA(442460)。2siRNA發(fā)卡DNA的退火后，電泳可見明亮條帶，均位于約60bp處，與設計完全一致。3用BamHI和ClaI雙酶切對重組質粒進行鑒定，得到pSUPERneoSlil、pSUPERneo—Sli2和pSUPERneo—C。4對重組子pSUPERneo—Slil、pSUPERneoSli2ffllpSUPER—neo—C插入片段DNA序列測序，結果與設計完全一

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