新型抑癌蛋白Nischarin在乳腺癌中的表達及對乳腺癌細胞生物學行為影響的研究.pdf

1、第一部分新型抑癌蛋白Nischarin在乳腺癌組織中的表達及與臨床病理參數(shù)之間的關(guān)系
　　目的：探討抑癌蛋白Nischarin在乳腺癌組織中的表達及其與臨床病理特征的關(guān)系。
　　方法：免疫組織化學法檢測67例乳腺癌和34乳腺癌癌旁標本的Nischarin表達水平;統(tǒng)計學分析其表達水平與患者年齡、T分期、臨床分期、ER/PR/HER-2狀態(tài)等臨床參數(shù)的相互關(guān)系。
　　結(jié)果：
　　1.Nischarin在乳腺癌組織中

2、和癌旁組織中的表達:
　　Nischarin在乳腺癌組織陽性表達率為34.3％,而癌旁組織中的表達陽性率為61.8%,顯著低于癌旁組織(p<0.05);
　　2.Nischarin與乳腺癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系:
　　Nischarin在乳腺癌組織中的表達與年齡、T分期、臨床分期表達無相關(guān)性(p>0.05),與PR、HER-2表達無相關(guān)性(p>0.05);Nischarin表達與ER表達有相關(guān)性(p<0.05)。
　

3、　結(jié)論：Nischarin的缺失可能與乳腺癌相關(guān),它的高表達可能在乳腺癌組織中發(fā)揮抑癌作用。
　　第二部分Nischarin對乳腺癌細胞生物學行為的影響
　　目的：篩選低表達Nischarin的細胞系,構(gòu)建Nischarin真核表達載體轉(zhuǎn)染已經(jīng)篩選出的乳腺癌細胞系,探討Nischarin對乳腺癌細胞生物學行為的影響。
　　方法：針對不同分化程度、ER/PR/HER2狀態(tài)的乳腺癌細胞系:T47D、MCF-7、MDA-MB

4、-231和正常乳腺上皮細胞HBL-100,通過RT-PCR和Western-blot和等方法檢測Nischarin在mRNA水平和蛋白質(zhì)水平的表達,篩選出Nischarin低表達的細胞系;構(gòu)建Nischarin過表達質(zhì)粒載體pcDNA3.1-Nischarin,以及空白載體,將其經(jīng)脂質(zhì)體Lipofectamine?2000轉(zhuǎn)染至篩選好的細胞系中,采用和RT-PCR和Western-blot等方法檢測轉(zhuǎn)染后其細胞Nischarin在mRN

5、A水平和蛋白水平的表達,Transwell侵襲小室模型測定細胞體外侵襲能力,流式細胞儀檢測轉(zhuǎn)染前后細胞凋亡情況。
　　結(jié)果：通過篩選MDA-MB-231細胞系Nischarin表達最低,正常乳腺細胞HBL-100表達最高;Nischarin質(zhì)粒表達載體構(gòu)建經(jīng)測序鑒定后構(gòu)建成功;和RT-PCR和Western-blot方法檢測轉(zhuǎn)染后MDA-MB-231細胞NischarinmRNA及蛋白表達水平較空白組、空載體組表達水平高(p<0.

6、05);Transwell侵襲小室模型了解MDA-MB-231細胞體外侵襲能力,轉(zhuǎn)染組較空白組及空載體組侵襲能力減弱;空載體組、空白組和實驗組穿過小室的細胞數(shù)為252±34.59,244±31.0,181±17.62,三組有統(tǒng)計學差異(p<0.05),空載組與實驗組之間及空白組與實驗組之間均有統(tǒng)計學差異(p<0.05),流式細胞儀檢測腫瘤細胞凋亡率,空白組早期凋亡率和晚期凋亡率分別為(UR1.47%,LR1.68%);空載組:(UR1.