肝移植急性排斥大鼠腸道雙歧桿菌種群結(jié)構(gòu)變化特征的研究.pdf

1、目的：
　　利用變性梯度凝膠電泳(DGGE)及熒光定量PCR等方法對肝移植急性排斥及相關(guān)干預(yù)（抗生素、益生菌）大鼠腸道雙歧桿菌種群結(jié)構(gòu)變化及其多樣性特征進(jìn)行研究，以期發(fā)現(xiàn)與肝移植急性排斥反應(yīng)相關(guān)的雙歧桿菌菌種。
　　方法：
　　將純系雄性Lewis大鼠24只和BN大鼠42只按如下分組:
　　(1)假手術(shù)組(n=6):正常BN大鼠，只打開腹腔便縫合;
　　(2)同基因肝移植組(n=6):供、受體各6只，均采用

2、BN大鼠;
　　(3)異基因肝移植組(n=6):Lewis大鼠6只為供體，BN大鼠6只為受體;
　　(4)抗生素組(n=6):異基因肝移植(Lewis-BN)+2ml慶大霉素灌胃（4萬單位）;
　　(5)益生菌組(n=6):異基因肝移植(Lewis-BN)+2ml益生菌培菲康（長雙歧桿菌、嗜酸乳桿菌、糞鏈球菌三聯(lián)活菌膠囊，2.0×10^8CFU/ml）灌胃。上述大鼠肝移植利用改良的Kamada二套袖法，從而構(gòu)建肝移植排

3、斥反應(yīng)大鼠模型，分別于術(shù)前1天、術(shù)后1周和術(shù)后2周的采集糞便標(biāo)本，2周后處死大鼠采集肝臟組織及腔靜脈血用于分析肝臟病理改變、肝功能水平及血漿內(nèi)毒素水平，并利用巢式PCR-DGGE、RT-PCR等分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)分析不同時(shí)間段腸道雙歧桿菌種群結(jié)構(gòu)變化。
　　結(jié)果：
　　(1) DGGE圖譜顯示:術(shù)前1天，除益生菌組外，各組雙歧桿菌多樣性無顯著性差異;益生菌組多樣性相比異基因組多樣性下降(P＜0.05)。術(shù)后1周，和對照組、同

4、基因組相比，異基因組雙歧桿菌多樣性下降(P＜0.05);相比異基因組，抗生素組多樣性升高(P＜0.05)，益生菌組多樣性下降(P＜0.05)。術(shù)后2周，對照組、同基因組和異基因組之間雙歧桿菌多樣性無差異;相比異基因組，抗生素組多樣性升高(P＜0.05)，益生菌組多樣性下降(P＜0.05)。
　　(2)術(shù)前1天，對照組、同基因組、異基因組大鼠各種雙歧桿菌含量均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異;與異基因組相比，抗生素組總雙歧桿菌、長雙岐桿菌、小鏈雙歧桿菌

5、、兩雙歧桿菌含量下降(P＜0.05);而經(jīng)過培菲康灌胃后，益生菌組總雙歧桿菌、長雙歧桿菌、小鏈雙歧桿菌明顯增加(P＜0.05)。術(shù)后1周，與對照組相比，同基因組齒雙歧桿菌含量有所增加(P＜0.05)，異基因組總雙歧桿菌、小鏈雙歧桿菌、動(dòng)物雙歧桿菌含量減少(P＜0.05)，齒雙歧桿菌增加(P＜0.05)，同時(shí)，異基因組相比同基因組，小鏈雙歧桿菌有所下降;和異基因組相比，抗生素組總雙歧桿菌、長雙歧桿菌、小鏈雙歧桿菌及動(dòng)物雙歧桿菌含量下降(P

6、＜0.05)，而益生菌組總雙歧桿菌、長雙歧桿菌、動(dòng)物雙歧桿菌含量增加(P＜0.05)。術(shù)后2周，和對照組相比，同基因組齒雙歧桿菌含量上升(P＜0.05);異基因組小鏈雙歧桿菌、動(dòng)物雙歧桿菌含量下降(P＜0.05)，齒雙歧桿菌含量上升(P＜0.05)。此外，異基因組相比同基因組小鏈雙歧桿菌有所下降(P＜0.05)。和異基因組相比，抗生素組總雙歧桿菌、長雙歧桿菌、小鏈雙歧桿菌、嬰兒雙歧桿菌含量下降(P＜0.05);益生菌組總雙歧桿菌、長雙歧

7、桿菌、小鏈雙歧桿菌、動(dòng)物雙歧桿菌上升(P＜0.05)。
　　結(jié)論：
　　(1)肝移植急性排斥反應(yīng)可造成大鼠腸道雙岐桿菌結(jié)構(gòu)變化，主要表現(xiàn)為雙歧桿菌多樣性下降，總雙歧桿菌、長雙歧桿菌、小鏈雙歧桿菌等種類含量的下降及齒雙歧桿菌含量的上升。
　　(2)應(yīng)用抗生素和益生菌處理肝移植大鼠可減輕移植排斥反應(yīng)，并在一定程度上恢復(fù)腸道雙歧桿菌的結(jié)構(gòu)?？股乜稍斐梢浦泊笫竽c道雙歧桿菌多樣性的上升，同時(shí)引起雙歧桿菌總量及長雙歧桿菌、動(dòng)物雙