雙黃連藥效物質(zhì)基礎(chǔ)的研究.pdf

1、目的：闡述中藥復(fù)方雙黃連解熱、抗炎的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)。 方法：雙黃連方中黃芩的提取提純方法較成熟，其提取物中黃芩苷的含量大于90％，故不對(duì)黃芩苷的提取工藝進(jìn)行研究。對(duì)雙黃連方中的金銀花和連翹的提取溶劑，提取方法，提取時(shí)間進(jìn)行研究，設(shè)計(jì)正交試驗(yàn)，篩選出最佳的提取工藝。分別采用含水乙醇和水作為金銀花和連翹的提取溶劑，各設(shè)計(jì)正交試驗(yàn)，以金銀花中的綠原酸和連翹中的連翹苷作為考察指標(biāo)，將兩正交試驗(yàn)篩選出的最佳工藝進(jìn)行比較，含水乙醇提取液中所含

2、的綠原酸、連翹苷等成分的提取轉(zhuǎn)移率均明顯高于用傳統(tǒng)工藝的水煎煮提取。在前期金銀花、連翹乙醇提取最佳工藝確定的基礎(chǔ)上，采用AB-8型大孔吸附樹脂對(duì)雙黃連乙醇提取物凈化，從樹脂徑高比、吸附濃度、吸附流速、洗脫劑濃度等方面對(duì)大孔吸附樹脂純化工藝條件進(jìn)行優(yōu)化，以總酚、總黃酮的含量為考察指標(biāo)，篩選最佳的純化工藝。在金銀花、連翹乙醇提取物加入處方量黃芩提取物抗炎解熱療效確切的基礎(chǔ)上，以干酵母致大鼠發(fā)熱為雙黃連有效部位解熱模型，腹腔注射醋酸致小鼠腹腔

3、毛細(xì)血管通透性增高為雙黃連有效部位抗炎模型，比較大孔吸附樹脂不同水-乙醇梯度洗脫部位提取物的抗炎、解熱作用，篩選出雙黃連抗炎、解熱的有效部位。乙醇提取物通過大孔吸附樹脂，用不同濃度的乙醇洗脫得到4個(gè)洗脫部位。比較4個(gè)洗脫部位加入處方量黃芩提取物后的抗炎、解熱作用。采用高效液相色譜法建立了主要化學(xué)成分綠原酸、連翹苷、黃芩苷的含量測(cè)定方法，并進(jìn)行了系統(tǒng)適用性試驗(yàn)(線形、精密度、穩(wěn)定性、重復(fù)性、回收率及空白試驗(yàn)等)，對(duì)自制的3批樣品進(jìn)行了含量

4、測(cè)定。采用高效液相色譜法建立了雙黃連有效部位及其原藥材在同一波長(zhǎng)下的HPLC指紋圖譜，作為控制其質(zhì)量的定性指標(biāo)。通過對(duì)十批樣品的色譜檢測(cè)和圖譜分析，建立了雙黃連有效部位的指紋圖譜，所得圖譜清晰、分離度穩(wěn)定性良好，可用于雙黃連有效部位質(zhì)量控制。以峰面積較大、分離度好、保留時(shí)間適中的、峰穩(wěn)定的黃芩苷色譜峰為參照峰，以其保留時(shí)間和峰面積作為1，分別計(jì)算其它各共有指紋峰的相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積，得到雙黃連有效部位指紋圖譜的相關(guān)技術(shù)參數(shù)，并在此

5、基礎(chǔ)上進(jìn)行了雙黃連有效部位與各原藥材的成分相關(guān)性研究，在260nm檢測(cè)波長(zhǎng)下找出與原藥材保留時(shí)間及其紫外吸收光譜一致的色譜峰，闡明了有效部位中主要指紋峰的藥材來(lái)源。并用添加對(duì)照品的方法對(duì)共有指紋峰進(jìn)行了化學(xué)成分的歸屬和確定。 結(jié)果：雙黃連中金銀花、連翹的最佳提取工藝為加10倍量80％乙醇，溫浸30分鐘，回流提取2次，每次1小時(shí)，濾過，合并乙醇提取液，減壓回收乙醇至無(wú)醇味，并繼續(xù)濃縮至稠膏。最佳純化工藝為金銀花、連翹乙醇提取液減壓

6、回收溶劑至無(wú)醇味，加蒸餾水稀釋成1.5g·ml-1(生藥量)，樹脂柱的徑高比為1：10，最大的吸附量與樹脂體積比為1：3．3，水洗脫體積為3倍樹脂體積，洗脫劑為70％乙醇，用量為4倍樹脂體積。雙黃連的有效部位為3、4號(hào)部位，與原全方雙黃連提取物相比的藥效無(wú)明顯差異。結(jié)合第二部分對(duì)總成分的考察，確定70％乙醇洗脫部位為雙黃連解熱、抗炎的有效部位。并對(duì)有效部位中的指標(biāo)性成分進(jìn)行了定量分析。建立了該有效部位的高效液相指紋圖譜，在260nm檢測(cè)

7、波長(zhǎng)下，有29個(gè)峰為主要共有峰，確定其為共有峰，各共有指紋峰的平均相對(duì)保留時(shí)間的RSD為0.11％～0.69％，相對(duì)峰面積比值的RSD為1.05％～2.60％，可見對(duì)于不同批次的供試品而言，各共有指紋峰的相對(duì)保留時(shí)間及峰面積的比值相差不大，重現(xiàn)性良好。通過添加對(duì)照品的方式確認(rèn)出5個(gè)有效成分，分別為：5號(hào)峰(綠原酸)，6號(hào)峰(咖啡酸)，14號(hào)峰(蘆丁)，19號(hào)峰(連翹苷)，23號(hào)峰(黃芩苷)。 結(jié)論：本課題較好的闡述了復(fù)方雙黃連抗