新型肝癌細胞株的建立及其生物學功能初探.pdf

1、目的:原發(fā)性肝癌是目前常見的惡性腫瘤之一，因其發(fā)病率高、治療困難、死亡率高，嚴重威脅全世界人類特別是東亞及環(huán)太平洋地區(qū)人民的生命健康。由于肝癌的發(fā)病和轉移機制不能直接在人體上進行，所以建立人肝癌細胞系和人肝癌細胞系的動物模型用于體外或體內研究尤為重要。迄今為止，已建立的一系列人肝癌細胞系為肝癌的發(fā)病機理和治療研究奠定了良好的基礎。但是由于每一種肝癌細胞的來源及生物學特性不同，而且體外建立的人肝癌細胞系會發(fā)生轉化，這樣就給實驗結果帶來了不

2、確定性。研究資料顯示現(xiàn)有的人肝癌細胞系資源還遠遠不能滿足研究的需要，所以本課題的實驗目的是建立一株來源于原發(fā)性肝癌的新型細胞系，為肝癌的發(fā)病機制、轉移機制和抗腫瘤藥物的研究提供良好的細胞模型。
　　 方法:膠原酶消化法對手術切除的新鮮肝癌標本進行原代培養(yǎng);細胞克隆島擴大培養(yǎng)法純化肝癌細胞;胰蛋白酶消化傳代培養(yǎng)細胞;細胞的形態(tài)學用倒置光鏡觀察;胎盤藍染色法計數(shù)細胞凍存后復蘇的存活率;細胞計數(shù)法測定貼壁率和細胞生長曲線;PCR和We

3、stern-blot法檢測肝細胞標志物白蛋白(AAT)、α-抗胰蛋白酶(ALB)在細胞中的表達;流式細胞儀分析細胞周期和DNA組成;免疫缺陷鼠皮下成瘤實驗，計算異種移植率;常規(guī)制備染色體標本，拍照分析核型;DAPI染核法鑒定細胞系的污染情況;HCVcc（丙肝病毒上清）感染該細胞，PCR檢測細胞內是否有HCV病毒;抗腫瘤藥物TRAIL和索拉菲尼分別處理細胞，流式細胞儀檢測細胞凋亡情況。
　　 結果:成功建立一株新的人肝癌細胞系，命