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1、目的:殺菌肽,又名殺菌/滲透性增強蛋白(bactericidal/Permeability-increasing protein,BPI),是在中性粒細胞中發(fā)現(xiàn)的一種陽離子抗菌糖蛋白,分子量為55KD,具有選擇性殺傷革蘭氏陰性細菌(G-菌),中和內(nèi)毒素,抑制血管內(nèi)皮細胞增生等功能.研究發(fā)現(xiàn)BPI的N端片段具有與BPI同等的功能.目前BPI已被認為是極有發(fā)展前途的新一代高效殺菌、中和內(nèi)毒素和抑制血管增生的藥物蛋白.本課題在畢赤酵母中進行了
2、BPI N端活性片段的分泌表達.采用RT-PCR方法,從慢性粒細胞白血病患者的外周血白細胞中擴增得到長度約1.5kb的BPI的cDNA,將其克隆至pUCm-T載體中,然后從質(zhì)粒pUCm-BPI上PCR擴增得到編碼BPI氨基端196個氨基酸的基因片段BPI 588,將BPI588克隆到表達載體pPIC9K上,使其準確融合于α-交配因子分泌信號之后,電擊轉(zhuǎn)化畢赤酵母宿主菌GS115/His-.對篩選出的酵母重組子的基因組DNA作PCR分析,
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