(U74389G)對梗阻性黃疸大鼠肝臟脂質過氧化損傷治療作用的研究.pdf

1、目的:
　　梗阻性黃疸（Obstructive jaundice，OJ）一旦發(fā)生后可導致機體、肝、腎等器官及組織相對應的病理生理改變，其中影響最大和最嚴重的損傷為對肝細胞的損傷，其損傷主要由炎癥反應及氧化應激兩方面造成，由毒素血癥等原因引發(fā)的炎癥反應所造成的肝細胞損傷而最終導致肝細胞死亡的機制及過程已被人們廣泛的研究。隨著近年來人們對梗阻性黃疸發(fā)生后機體氧化應激所造成的肝細胞損傷的研究的逐漸深入，我們對其認識也開始清晰，但目前對氧

2、化機體氧化應激所引起的肝細胞的損傷仍缺乏有效的治療手段。本實驗通過SD大鼠建立OJ模型，應用拉扎堿類藥物(U74389G)對大鼠進行干預治療，通過觀察大鼠肝細胞中MDA及SOD含量變化、肝細胞病理及肝功能等各項指標的改變。探討拉扎堿類藥物(U74389G)對OJ肝細胞保護作用及相關機制。
　　方法:
　　1.實驗動物分組:將36只S-D雌性大鼠，體重200g～250g隨機分為四組每組9只:(1)正常組（N組），(2)假手術組

3、（SO組），(3)陽性對照組:膽總管結扎組（BDL組），(4)實驗組:膽總管結扎+U74389G組8mg/kg(BDL+ U74389G組)。
　　2.動物模型制作:(1)正常組不手術(2) SO組開腹后單純游離膽管不予結扎;(3) BDL組開腹后游離出膽總管，于十二指腸上段雙重結扎并離斷膽總管，術后6小時開始進食;(4) BDL+U74389G組開腹后游離出膽總管，雙重結扎并離斷膽總管，術后6小時開始進食，術后第5天始按實驗組8

4、mg/kg劑量腹腔注射U74389G，每天一次，連續(xù)腹腔注射7天。N組，SO組，BDL組等對照組每天腹腔內注射同等劑量的生理鹽水。
　　3.檢測方法和觀察內容:術后第12天處死大鼠，于每只大鼠下腔靜脈抽血，并迅速切取左葉新鮮肝組織，制備標本后保存。(1)肝組織蘇木素-伊紅染色觀察肝臟組織病理變化情況。(2)血清谷丙轉氨酶(ALT)、谷草轉氨酶(AST)、總膽紅素(TBL)，用自動生化儀測量。(3)檢測大鼠肝細胞中勻漿中MDA、SO

5、D的含量，用硫代巴比妥酸(TBA)法測定肝組織MDA含量，以黃嘌呤氧化酶法測定SOD活力。(4)觀察各組大鼠的尿液、皮膚、糞便及肝臟顏色的改變。
　　4.統(tǒng)計學處理所有檢測結果均以均數(shù)±標準差((x)±s)表示，用SPSS11.5進行單因素方差分析t檢驗，P＜0.05即認為有統(tǒng)計學意義，P＜0.01有顯著性差異。
　　結果:
　　1.大鼠的一般情況:
　　(1)正常組（N組）:大鼠皮膚尿液顏色無改變，糞便顏色正常

6、，對疼痛刺激反應無明顯變化。
　　(2)假手術組（SO組）:大鼠皮膚、尿液顏色無改變，糞便顏色正常，對疼痛刺激反應靈敏。
　　(3)陽性對照組（BDL組）:皮膚、尿液顏色呈深黃色，糞便顏色部分呈陶土樣，對疼痛刺激反應遲鈍。
　　(4)實驗組（BDL+U74389G組）:皮膚、尿液顏色呈深黃色，糞便顏色部分呈陶土樣，對疼痛刺激反應遲鈍，與BDL組比較無明顯變化。
　　2.肉眼觀察及光鏡下觀察HE染色結果:
　

7、　(1)N組:開腹后有少量腹水，肝臟顏色紅潤，被膜光滑，與周圍組織無粘連，表面光澤，質地柔軟，膽總管未見擴張，光鏡下肝臟形態(tài)結構正常，無炎性細胞浸潤，細胞無腫脹、變性和壞死，肝細胞索排列整齊。
　　(2) SO組:開腹可見有少量清亮腹水，肝臟顏色紅潤無腫脹，被膜光滑，與周圍組織無粘連，表面有光澤，質地柔軟，膽管未見擴張;光鏡下觀察肝臟形態(tài)結構正常，無炎性細胞浸潤，細胞無明顯腫脹、變性和壞死，肝細胞索排列整齊。
　　(3) B

8、DL組:開腹后有較多黃色腹水，肝臟顏色深黃，明顯腫脹，且呈不同程度的淤膽狀，表面無色澤差，近肝側膽管呈囊樣擴張瘀膽明顯，直徑約0.3～0.6cm不等的擴張，少數(shù)動物肝被膜可見散在的白色膿苔，與周圍組織粘連;光鏡下觀察肝臟組織表現(xiàn)為肝細胞腫脹變大、空泡變性、壞死面積較大，并伴有大量炎性細胞浸潤，纖維組織及小膽管廣泛增生，部分肝組織增生也較明顯，結構紊亂呈現(xiàn)出肝硬化特征。
　　(4) BDL+U74389G組:開腹后見少量淺黃色腹水，

9、肝臟顏色淡黃色，輕度腫脹，近側膽管仍有囊樣擴張并伴有膽汁淤積，近肝側膽管呈直徑約0.3～0.4cm不等的擴張，少量動物肝被膜可見散在白色膿苔，與周圍組織輕度粘連;光鏡下觀察肝臟組織見部分動物肝細胞有輕度濁腫、空泡變性等病理改變。大部分動物僅見肝細胞出現(xiàn)點狀壞死和少量纖維組織增生、匯管區(qū)結構可分辨，與BDL組比較肝臟病理損害程度有明顯改善。
　　3.各組大鼠血清ALT、AST、TBIL的變化
　　3.1 ALT BDL組、BD

10、L+U74389G組較正常組（N組），假手術組（SO組）血清ALT均有不同程度升高，其中BDL組與N組及SO組比較有顯著差異(P＜0.01)，BDL組與BDL+U74389G組比較有顯著差異(P＜0.05)。
　　3.2 AST BDL組、BDL+U74389G組較正常組（N組）及假手術組(SO組)血清AST均有不同程度升高，其中BDL組與N組及SO組比較有顯著差異(P＜0.01)，BDL組與BDL+U74389G組比較有顯著差異

11、（P＜0.05）。
　　3.3 TBIL BDL組、BDL+U74389G組較正常組（N組）及假手術組(SO組)血清TBIL均有不同程度升高，以BDL組最明顯，其中BDL組與N組及SO組比較有顯著差異（P＜0.01），BDL組與BDL+U74389G組比較有顯著差異（P＜0.05）。
　　4.肝細胞中MDA、SOD變化
　　4.1 MDA BDL組與N組及SO組比較MDA含量明顯增加(P＜0.01);經(jīng)U74389G治