非洲菊和月季轉(zhuǎn)基因技術(shù)研究.pdf

1、非洲菊(Gerbera jamesonii Bolus)由于其花朵碩大、色彩豐富艷麗而成為禮品花束、花籃和藝術(shù)插花等的理想材料，深得廣大消費(fèi)者青睞。
　　 月季以其花朵美麗、花色多樣、香味濃郁、四季開花等特點(diǎn)深受人們的喜愛，月季在我國廣泛栽培，也是城市綠化的主要材料，有很高的商業(yè)價值。
　　 本研究以非洲菊和月季的愈傷組織為材料，分別用農(nóng)桿菌介導(dǎo)法、基因槍轟擊法以及兩者結(jié)合的方法對其進(jìn)行轉(zhuǎn)化。對轉(zhuǎn)化后的受體材料進(jìn)行了GU

2、S組織化學(xué)染色，并對經(jīng)卡那霉索篩選所獲得的非洲菊抗性苗進(jìn)行PCR檢測，證明非洲菊高效遺傳轉(zhuǎn)化體系已初步建立。研究結(jié)果如下：
　　 1.以非洲菊‘紅帽子’品種為材料，置于分化培養(yǎng)基MS+6-BA0.3mg/L+NAA0.1 mg/L中進(jìn)行增殖，將葉柄切下，平放在愈傷誘導(dǎo)培養(yǎng)基MS+6-BA8mg/L+NAA0.1 mg/L上培養(yǎng)1～2周，即可獲得愈傷組織。
　　 2.以月季品種‘云粉’為材料，外植體消毒處理后，將葉片撕下，

3、切取小葉，葉背向下置于愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，結(jié)果證明MS+2，4-D5 mg/L+L.脯氨酸300 mg/L的培養(yǎng)基效果最好。
　　 3.將非洲菊小苗分別置于卡那霉素濃度為0，15，20，25，30，40，50 mg/L的分化培養(yǎng)基上，對其進(jìn)行卡那霉素的抗性測定，實(shí)驗(yàn)證明，非洲菊對卡那霉素非常敏感，25 mg/L的濃度即可對其正常生長產(chǎn)生抑制。
　　 4.分別采用農(nóng)桿菌介導(dǎo)法、基因槍轟擊法以及兩者相結(jié)合的方法對非洲菊和月

4、季的愈傷組織進(jìn)行轉(zhuǎn)化，并對所獲得的轉(zhuǎn)化體進(jìn)行瞬時表達(dá)檢測。結(jié)果表明農(nóng)桿菌侵染時，菌液濃度OD600值為0.4，處理時間為Smin時，轉(zhuǎn)化效率高；基因槍轟擊時，轟擊距離為9cm，壓力為900psi時，轉(zhuǎn)化效率高；幾種轉(zhuǎn)化方法比較，基因槍轟擊/農(nóng)桿菌感染法的瞬時表達(dá)率最高，非洲菊達(dá)到38.2％，月季為30.6％。
　　 5.采用CTAB法對所獲得的非洲菊轉(zhuǎn)化再生苗進(jìn)行DNA的提取，并利用PCR對其進(jìn)行鑒定，最終獲得25株陽性材料。<