利用轉(zhuǎn)基因和基因剔除技術(shù)研究KIF18A和Adiponectin基因功能.pdf

1、本研究通過對PLAGl轉(zhuǎn)基因小鼠轉(zhuǎn)基因插入位點(diǎn)進(jìn)行鑒定，首次發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)基因插入小鼠2號染色體基因組后，引起KIFl8A基因缺失，發(fā)現(xiàn)該基因缺失導(dǎo)致雄性小鼠不育，并對其可能的機(jī)制進(jìn)行了研究；利用同源重組技術(shù)構(gòu)建成功KIFl8A全基因打靶質(zhì)粒并獲得了同源重組ES細(xì)胞克隆。 　　本研究通過向受精卵導(dǎo)入外源轉(zhuǎn)基因DNA序列后，轉(zhuǎn)基因序列可能隨機(jī)的插入小鼠基因組的任意位置，其中約5-10％的轉(zhuǎn)基因插入位點(diǎn)位于小鼠的一個(gè)內(nèi)源性基因內(nèi)，導(dǎo)致這些基因的斷

2、裂或缺失而表達(dá)喪失或表型異常。這種情況下，轉(zhuǎn)基因作為斷裂或缺失基因的分子標(biāo)記物，為區(qū)分突變性表型缺陷和潛在的遺傳性缺陷提供了一種直接的方法。所以用轉(zhuǎn)基因插入突變分離有趣表型相關(guān)新基因并對其功能進(jìn)行進(jìn)一步研究不失為一種有效的方法。 　　本研究同時(shí)設(shè)計(jì)構(gòu)建了KIFl8A全基因剔除打靶質(zhì)粒，通過ES細(xì)胞打靶，獲得了兩個(gè)同源重組ES細(xì)胞克隆，期望建立KIFl8A定位剔除基因小鼠模型，對其功能進(jìn)行更深入研究。 　　本論文課題還建立了脂肪特異分