BPOZ基因剔除小鼠模型的建立及BPOZ基因功能的研究.pdf

1、BPOZ(Bood POZ containing gene)又名EFlABP(elongation factor 1A bindingprotein),基因位于染色體的3q21.3,其序列在不同種屬間相當(dāng)保守.BPOZ蛋白由ANK(ankyrin repeat,錨蛋白重復(fù))和BTB(Broad-Complex,Tramtrack andBric a brac)結(jié)構(gòu)域組成.ANK和BTB結(jié)構(gòu)域介導(dǎo)蛋白相互作用,含這兩個(gè)結(jié)構(gòu)域的蛋白常與發(fā)育

2、及腫瘤發(fā)生密切相關(guān),提示BPOZ可能有重要的生物學(xué)功能.BPOZ在卵巢癌組織中的表達(dá)降低,抑癌基因PTEN可誘導(dǎo)BPOZ表達(dá)升高.BPOZ能抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng),轉(zhuǎn)染并穩(wěn)定表達(dá)BPOZ的結(jié)腸癌細(xì)胞生長(zhǎng)變慢,細(xì)胞周期的S期延長(zhǎng)并有明顯的G1/S轉(zhuǎn)變延緩.因此BPOZ可能是一個(gè)參與PTEN信號(hào)傳導(dǎo)通路的細(xì)胞生長(zhǎng)或腫瘤抑制基因.基因剔除(gene knockout)是在小鼠整體水平研究基因在生物體內(nèi)(in vivo)功能的一種直接有效的方法.我們

3、擬通過(guò)基因剔除技術(shù)建立BPOZ基因缺失小鼠,通過(guò)對(duì)BPOZ基因剔除小鼠的表型分析來(lái)研究BPOZ基因缺失對(duì)小鼠生長(zhǎng)發(fā)育和生理功能等方面的影響,以及BPOZ與腫瘤發(fā)生的關(guān)系.為探討B(tài)POZ基因剔除對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)的影響,我們采用細(xì)胞生長(zhǎng)曲線、<'3>H胸苷摻入、裸鼠荷瘤、細(xì)胞周期分析等一系列實(shí)驗(yàn)來(lái)評(píng)價(jià)BPOZ-/-ES細(xì)胞的增殖能力.實(shí)驗(yàn)結(jié)果均證明BPOZ-/-ES細(xì)胞的生長(zhǎng)變慢,細(xì)胞周期分析發(fā)現(xiàn)有G1/S期阻滯.進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)BPOZ-/-M

4、EF細(xì)胞也明顯生長(zhǎng)減慢.BPOZ-/-細(xì)胞生長(zhǎng)變慢的結(jié)果說(shuō)明BPOZ可能是細(xì)胞正常生長(zhǎng)過(guò)程中的必要組分.BPOZ可能在調(diào)節(jié)細(xì)胞生長(zhǎng)上起雙重作用:即一定水平的BPOZ維持細(xì)胞的正常生長(zhǎng),但在高表達(dá)時(shí)抑制細(xì)胞的生長(zhǎng).為闡明BPOZ是否介導(dǎo)特異靶蛋白的降解及其作用機(jī)理,我們研究了BPOZ和EF1A(elongation factor 1A)相互結(jié)合的結(jié)構(gòu)域以及BPOZ不同結(jié)構(gòu)域和介導(dǎo)EF1A降解的關(guān)系.首先我們用蛋白體外結(jié)合實(shí)驗(yàn)證實(shí)BPOZ能