黃連與生地含藥血清改善棕櫚酸誘導的NIT-1胰島β細胞損傷的分子機制.pdf

1、目的：
　　通過觀察比較黃連與生地及其配伍含藥血清改善棕櫚酸誘導NIT-1胰島β細胞的凋亡及功能損傷的情況,進而從胰島細胞凋亡途徑與葡萄糖刺激胰島素分泌(GSIS)的信號通路兩方面探討黃連與生地及其配伍減輕脂肪酸對胰島細胞“脂毒性”損傷的作用,分析可能的分子機制。
　　方法：
　　第一部分黃連與生地含藥血清改善棕櫚酸誘導的NIT-1胰島β細胞凋亡
　　采用0.25mmol/L的棕櫚酸(palmit ate,PA)

2、干預胰島NIT-1細胞24h的“脂毒性”模型,將NIT-1細胞分為模型組、黃連含藥血清組、生地含藥血清組、黃連-生地含藥血清組、瑞格列奈組,另設空白對照組及正常血清組,用AnnexinV-PI雙標記法流式細胞術檢測細胞凋亡率。
　　第二部分黃連與生地含藥血清改善棕櫚酸誘導的NIT-1胰島β細胞葡萄糖刺激胰島素分泌功能損傷的分子機制
　　用含不同濃度葡萄糖的KRBH溶液刺激各組NIT-1細胞胰島素釋放,生物發(fā)光法檢測細胞內(nèi)AT

3、P/ADP,膜片鉗測定細胞的K+ATP通道電流,膜片鉗測定細胞的Ca2+通道電流,激光共聚焦顯微鏡測胞內(nèi)Ca2+濃度,放免法測各組胰島素濃度。
　　結(jié)果：
　　第一部分黃連與生地含藥血清改善棕櫚酸誘導的NIT-1胰島β細胞凋亡
　　與空白對照組比,模型組凋亡率明顯升高(P<0.01),各個干預組凋亡率均低于模型組(P<0.01),黃連-生地配伍血清組凋亡率低于正常血清組、生地血清組及黃血清組(P<0.01)
　　

4、第二部分黃連與生地含藥血清改善棕櫚酸誘導的NIT-1胰島β細胞葡萄糖刺激胰島素分泌功能損傷的分子機制
　　1.與空白對照組比,模型組細胞胰島素濃度明顯降低(P<0.01),各干預組胰島素濃度明顯高于模型組(P<0.01),其中,黃連-生地配伍血清組胰島素濃度明顯高于正常血清組、黃連血清組和生地血清組(P<0.05)
　　2.與空白對照組比,模型組細胞內(nèi)ATP/ADP的比值明顯降低(P<0.01),各干預組比值明顯高于模型組(

5、P<0.01),其中,黃連-生地配伍血清組ATP/ADP濃度明顯高于正常血清組、生地血清組和黃連血清組(P<0.05)
　　3.與空白對照組比,模型組細胞K+ATP離子通道電流明顯升高(P<0.01),各干預組細胞K+ATP離子通道電流明顯低于模型組(P<0.01),其中,黃連-生地配伍血清組較正常血清組、黃連血清組和生地血清組顯著降低(P<0.05)
　　4.與空白對照組比,模型組細胞Ca2+離子通道電流明顯降低(P<0.

6、01),各干預組細胞Ca2+離子通道電流明顯高于模型組(P<0.01),其中,黃連-生地配伍血清組較正常血清組、黃連血清組和生地血清組顯著升高(P<0.01)
　　5.與空白對照組比,模型組細胞內(nèi)鈣離子濃度明顯降低(P<0.01),各干預組細胞內(nèi)鈣離子濃度明顯高于模型組(P<0.01),其中,黃連-生地配伍血清組較正常血清組、黃連血清組和生地血清組顯著升高(P<0.05)。
　　結(jié)論：
　　1.黃連和生地及其配伍能減少