犬IFN-α基因的克隆、表達(dá)及其生物學(xué)活性的研究.pdf

1、干擾素(IFN)作為細(xì)胞因子超家族中的一員，是一類由特定誘生劑作用于細(xì)胞分泌的具有一定抗病毒、抗腫瘤以及免疫調(diào)節(jié)功能等活性的糖蛋白，分為I和Ⅱ兩個(gè)型。Ⅰ型IFN包括a、β、ω等亞型，而Ⅱ型IFN則只有γ一個(gè)型。其中，IFN-a由于具有廣譜的抗病毒活性以及一定的免疫調(diào)節(jié)功能而逐漸成為研究的熱點(diǎn)．IFN-a主要由白細(xì)胞產(chǎn)生，與IFN-β，IFN-ω作用于同一受體，能抑制病毒DNA和蛋白質(zhì)合成，促進(jìn)MHC I類分子提呈抗原。 目前，犬

2、病毒性疾病在全球范圍內(nèi)呈現(xiàn)出越來(lái)越嚴(yán)重的趨勢(shì)，在對(duì)這些病毒病的防治中，由于還沒(méi)有犬干擾素的產(chǎn)品問(wèn)世，都是使用人干擾素來(lái)代替犬干擾素。自Himmler等人于1987年首先開(kāi)始了犬a(chǎn)-干擾素基因的研究以來(lái)，一些國(guó)外學(xué)者利于大腸桿菌或桿狀病毒等表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)出了犬a(chǎn)-干擾素基因，并對(duì)其生物學(xué)活性進(jìn)行了初步探討，而國(guó)內(nèi)則只有王艷等在大腸桿菌與巴斯德畢赤酵母中對(duì)犬a(chǎn)-干擾素基因1亞型進(jìn)行了表達(dá)，還未見(jiàn)犬a(chǎn)-干擾素抗犬病毒性疾病方面的研究報(bào)道。

3、 本實(shí)驗(yàn)通過(guò)RT-PCR方法從畢格犬外周血淋巴細(xì)胞中克隆出了犬的a-擾素基因1亞型，將PCR產(chǎn)物連接至pGEM-Teasy載體，挑取酶切鑒定陽(yáng)性質(zhì)粒進(jìn)行測(cè)序，測(cè)序結(jié)果表明此次克隆的犬a(chǎn)-擾素基因1亞型同與GenBank上所發(fā)表的登錄號(hào)為m28624的序列同源性為100％。然后把該基因克隆進(jìn)桿狀病毒轉(zhuǎn)移載體pFastBacI，在桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)中對(duì)其進(jìn)行了表達(dá)，將sf9細(xì)胞感染的P3代毒的培養(yǎng)上清通過(guò)VSV-CEF檢測(cè)系統(tǒng)檢測(cè)證實(shí)獲得了