基于果糖自氧化的抗氧化劑篩選方法研究.pdf

1、隨著自由基醫(yī)學(xué)和自由基生物學(xué)的發(fā)展，自由基和病變的關(guān)系越來(lái)越受到人們的關(guān)注。為此，清除自由基的研究日益引起人們的重視?？蒲腥藛T建立了許多篩選抗氧化劑和評(píng)價(jià)抗氧化劑抗氧化能力的自由基產(chǎn)生體系，如經(jīng)典的產(chǎn)生·OH的Fenton反應(yīng)和類 Fenton反應(yīng)體系、產(chǎn)生O2-·的鄰苯三酚體系以及穩(wěn)定自由基DPPH·、ABTS+體系等。然而，這些自由基產(chǎn)生體系生成的自由基均是單一的或者有的自由基并不存在于人體內(nèi)，與機(jī)體的實(shí)際情況不符。人體內(nèi)產(chǎn)生的自由

2、基是多樣的、且處于不斷變化過程中。自由基的種類、活性、壽命等與其所處的環(huán)境有關(guān)。而抗氧化劑的抗氧化能力與其清除的自由基種類、活性、環(huán)境等密切相關(guān)，因此僅僅依據(jù)清除某一特定的無(wú)變化的自由基難以說明抗氧化劑的實(shí)際抗氧化能力，缺乏生理學(xué)和病理學(xué)意義。
　　研究表明高血糖患者體內(nèi)單糖的自氧化可產(chǎn)生多種大量活性氧自由基，本文以果糖自氧化過程產(chǎn)生自由基，研究了產(chǎn)生穩(wěn)定自由基體系的條件，并基于此自由基產(chǎn)生體系進(jìn)行了抗氧化劑抗氧化能力的評(píng)價(jià)和篩選

3、。果糖自氧化過程產(chǎn)生動(dòng)態(tài)活性氧自由基與人體內(nèi)自由基的種類及變化過程相近，以此作為篩選抗氧化劑的體系能全面評(píng)價(jià)抗氧化劑的抗氧化能力并且有著重要的生理學(xué)和病理學(xué)意義。本文的主要研究?jī)?nèi)容如下：
　?、偻ㄟ^考察果糖自氧化的影響因素，對(duì)果糖自氧化體系的條件進(jìn)行優(yōu)化，建立果糖自氧化體系產(chǎn)生自由基的方法。分別考察了果糖的濃度，催化劑的濃度，溫度，pH值等對(duì)果糖自氧化的反應(yīng)速率的影響。產(chǎn)生的活性氧自由基最終轉(zhuǎn)化為·OH，以苯甲酸鈉捕獲并評(píng)價(jià)自由基

4、的量。并采用鹽酸小檗堿和阿魏酸初步驗(yàn)證了建立的自由基生成體系評(píng)價(jià)抗氧化能力的方法。
　　②基于果糖自氧化體系以熒光為檢測(cè)手段對(duì)九種抗氧化劑的抗氧化能力進(jìn)行評(píng)價(jià)，抗氧化能力選用IC50（半數(shù)抑制濃度）的大小作為比對(duì)的依據(jù)。結(jié)果表明多酚類抗氧化劑的抗氧能力與其分子中酚羥基，酮基的個(gè)數(shù)有密切關(guān)系，分子中酚羥基和酮基的個(gè)數(shù)越多抗氧化能力越強(qiáng)。而生物堿類的抗氧化劑的抗氧化能力和分子中―裸露的氮原子有關(guān)。
　　③基于果糖自氧化體系以高效

5、液相色譜為檢測(cè)手段，對(duì)九種抗氧化劑的抗氧化能力做出評(píng)價(jià)，以抑制果糖自氧化的裂解標(biāo)志性產(chǎn)物-甲醛為參考標(biāo)準(zhǔn)，通過比較 IC50對(duì)抗氧化劑的抗氧化能力做出評(píng)價(jià)。研究結(jié)果表明：多酚類抗氧化劑分子中的酚羥基和酮基的個(gè)數(shù)越多其抑制甲醛的效果越明顯，即抗氧化能力越強(qiáng)。這和用熒光的方法評(píng)價(jià)結(jié)果一致。
　　④參照果糖自氧化的條件應(yīng)用經(jīng)典的DPPH·體系，評(píng)價(jià)了九種抗氧化劑的抗氧化能力。結(jié)果表明：一些水溶較好多酚類的抗氧化劑的抗氧化能力與其分子中酚

6、羥基、酮基的個(gè)數(shù)有關(guān)。其結(jié)果與熒光、液相方法的評(píng)價(jià)結(jié)果一致。但是，由于 DPPH體系是有機(jī)溶劑體系并且要求在短時(shí)間內(nèi)完成反應(yīng)，因此限制了一些水溶性抗氧化劑的應(yīng)用，對(duì)一些需要長(zhǎng)時(shí)間反應(yīng)的抗氧化劑的評(píng)價(jià)也有一定限制。
　?、菰诳寡趸瘎┭芯窟^程中發(fā)現(xiàn)Trolox的抗氧化現(xiàn)象存在異常，即在果糖自氧化體系中經(jīng)典的抗氧化劑Trolox（水溶性的維生素E）有時(shí)不但不表現(xiàn)出抗氧化能力反而有―助氧化作用。為此，采用NBT（氯化硝基四氮唑藍(lán)）捕獲超氧