U0126對(duì)imDC誘導(dǎo)初始性CD4+T細(xì)胞分化為Treg細(xì)胞影響的體外研究.pdf

1、目的:從人外周血中獲得 imDC,與同種異體 CD4+T細(xì)胞混合培養(yǎng),運(yùn)用ERK1/2信號(hào)通路特異性阻斷劑U0126阻斷該通路,研究其在imDC誘導(dǎo)同種異體CD4+T細(xì)胞分化為Treg細(xì)胞中的作用,探討免疫耐受狀態(tài)建立的可能分子機(jī)制。
　　方法:取一名健康成人肘靜脈血50ml,密度梯度離心法從血液標(biāo)本中分離PBMC,將分離的PBMC培養(yǎng)2h,加入GM-CSF和IL-4聯(lián)合誘導(dǎo)、擴(kuò)增至第7天,使其轉(zhuǎn)化為 imDC,從細(xì)胞形態(tài)學(xué)、細(xì)胞

2、表面標(biāo)記物以及細(xì)胞功能三方面進(jìn)行鑒定。同法取一新生胎兒臍靜脈血50ml,從中分離單個(gè)核細(xì)胞,免疫磁珠分選法從單個(gè)核細(xì)胞中分離初始性CD4+T細(xì)胞,將其均分為5組細(xì)胞培養(yǎng),并分別作以下處理:(1)、空白組:臍靜脈血CD4+T細(xì)胞培養(yǎng)液中加入等量的U0126稀釋液和imDC稀釋液?jiǎn)为?dú)培養(yǎng);(2)、混合對(duì)照組:imDC與臍靜脈血CD4+T細(xì)胞以1:10的濃度比混合培養(yǎng),細(xì)胞培養(yǎng)液中加入等量的U0126稀釋液;(3)、低濃度U0126組:imD

3、C與臍靜脈血CD4+T細(xì)胞以1:10的濃度比混合培養(yǎng),細(xì)胞培養(yǎng)液中同時(shí)加入終濃度為10μmol/L的U0126;(4)、中濃度U0126組:imDC與臍靜脈血CD4+T細(xì)胞以1:10的濃度比混合培養(yǎng),細(xì)胞培養(yǎng)液中同時(shí)加入終濃度為30μmol/L的U0126;(5)、高濃度U0126組:imDC與臍靜脈血CD4+T細(xì)胞以1:10的濃度比混合培養(yǎng),細(xì)胞培養(yǎng)液中同時(shí)加入終濃度為50μmol/L的U0126。混合培養(yǎng)5天后,以FCM檢測(cè)初始性C

4、D4+T細(xì)胞轉(zhuǎn)化為Treg細(xì)胞的轉(zhuǎn)化率。
　　結(jié)果:(1)imDC的鑒定:在形態(tài)學(xué)方面,培養(yǎng)至第7天的單個(gè)核細(xì)胞懸浮生長(zhǎng),表面可見毛刺狀突起,體積較前增大。(2)FCM檢測(cè)Treg細(xì)胞的轉(zhuǎn)化率:imDC與CD4+T細(xì)胞混合培養(yǎng)后,FCM檢測(cè)初始性 CD4+T細(xì)胞轉(zhuǎn)化為 Treg細(xì)胞的轉(zhuǎn)化率,其結(jié)果如下:空白組:3.25士0.89,混合對(duì)照組:21.80士0.40,低濃度U0126組:22.58士0.52,中濃度U0126組40.8

5、1士0.81,高濃度U0126組:41.58士0.81。經(jīng)單因素方差分析,混合對(duì)照組和低濃度U0126組之間無顯著性差異,P值>0.05,中濃度U0126組和高濃度U0126組之間也無顯著性差異,P值>0.05,其余各組之間兩兩比較均有顯著性差異,P值<0.05。結(jié)果表明:當(dāng)U0126的濃度為30μmol/l時(shí)對(duì)該通路的阻斷作用顯著,當(dāng)繼續(xù)加大其濃度時(shí)Treg細(xì)胞轉(zhuǎn)化率增加不明顯,而當(dāng)小于該濃度時(shí)其轉(zhuǎn)化率與混合對(duì)照組的轉(zhuǎn)化率無顯著性差異