納米金體外遞送miR-375治療肝癌的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、原發(fā)性肝癌（Primary liver cancer，PLC，簡稱肝癌）是一種全球性高度惡性的腫瘤，其致死率在所有癌癥中排名第三位，嚴(yán)重威脅著人類的健康。手術(shù)切除仍然是目前治療肝癌的首選，但此方法存在著眾多缺點(diǎn)，如適用患者有限、術(shù)后易復(fù)發(fā)、生存率低等。因此致力于發(fā)現(xiàn)治療肝癌的新的分子靶點(diǎn)和探索新的抗肝癌藥物成為肝癌研究的重要方向。在前期研究中，我們發(fā)現(xiàn)肝癌細(xì)胞與肝癌組織較正常細(xì)胞與正常組織，miR-375有明顯過低表達(dá)的情況。前期研究還

2、證實(shí)了，上調(diào)miR-375的表達(dá)可以在體內(nèi)外抑制肝癌的生長。但是現(xiàn)有的藥物遞送系統(tǒng)多數(shù)具有不良的免疫反應(yīng)、潛在的生物不安全性、細(xì)胞毒性、較低的靶向性和攜帶效率等缺陷。因此，尋求一種新型核酸遞送載體迫在眉睫。
　　在本研究中，我們?yōu)榱死眉{米金遞送miRNA，首先通過兩種不同的水相還原法制備得到粒徑為十幾納米的納米金溶膠，并通過形貌、粒徑分布等優(yōu)選出Frens法為更為合適的納米金溶膠制備方法。該方法制備得到的納米金溶膠形貌呈現(xiàn)良好的

3、球形、粒徑均一、分散性也很好。在超純水溶解，4℃保存條件下，該納米金溶膠能夠在60 d內(nèi)保持很小范圍的粒徑變化。緊接著，我們通過Au-S共價(jià)鍵吸附成功將miR-375 mimics偶聯(lián)至金球表面，偶聯(lián)后的納米金溶膠在紅移了4個(gè)納米的525 nm出現(xiàn)最大紫外-可見吸收。之后，結(jié)合TaqMan qRT-PCR、FACS(Fluorescence Activated Cell Sorter)和熒光顯微成像，我們在HepG2、Hep3B和Huh

4、7這三株肝癌細(xì)胞系中證實(shí)納米金miR-375偶聯(lián)物能夠很好地被細(xì)胞所攝取。流式結(jié)果中，得到了高達(dá)96％的陽性率。最后，我們還發(fā)現(xiàn)通過納米金的遞送上調(diào)細(xì)胞內(nèi) miR-375的表達(dá)后，肝癌細(xì)胞的生長受到了顯著抑制，并且呈現(xiàn)一定范圍的劑量依耐性。這些結(jié)果都表明：我們參考Frens法制備的納米金溶膠粒徑合適、分散性與均一性良好，在偶聯(lián) miR-375后能夠很好地被細(xì)胞所攝取。該納米金miRNA偶聯(lián)物能夠成功上調(diào)肝癌細(xì)胞內(nèi)miR-375的表達(dá)，繼