NF-κB在CD40配基化介導(dǎo)CA46細(xì)胞凋亡中作用的研究.pdf

1、目的：探討CD40配基化對(duì)人類Burkitt淋巴瘤細(xì)胞株CA46細(xì)胞NF-κ B活性的影響，NF-κ B活性改變對(duì)CA46細(xì)胞凋亡以及凋亡相關(guān)因子表達(dá)的影響及其可能機(jī)制。 方法：應(yīng)用四氮唑藍(lán)快速比色法(MTT法)檢測(cè)可溶性重組人CD40L(soluble recombinant human CD40 Ligand，SrhCD40L)介導(dǎo)CD40配基化對(duì)CA46細(xì)胞增殖的影響，應(yīng)用凝膠電泳遷移率變動(dòng)分析 (Electrophore

2、tic Mobility Shift Assay，EMSA)檢測(cè)CD40配基化后NF-κ B與DNA序列的結(jié)合活性；應(yīng)用MTT法、流式細(xì)胞術(shù)、DNA梯度電泳檢測(cè)特異性抑制劑吡咯烷二硫氨基甲酸酯(pyrrolidine dithiocarbamate，PDTC)抑制NF-κ B活性對(duì)細(xì)胞增殖、凋亡的影響，采用半定量逆轉(zhuǎn)錄一聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)檢測(cè)NF-κ B活性受抑制后對(duì)bcl-2、survivin、p21、c-myc、hTERT

3、基因表達(dá)的影響，應(yīng)用western blot蛋白免疫印跡法檢測(cè)NF-κ B活性受抑制對(duì)bcl-2、c-myc、p21蛋白表達(dá)的影響。 結(jié)果：srhCD40L介導(dǎo)CD40配基化作用可抑制CA46細(xì)胞的生長(zhǎng)與增殖，可抑制CA46細(xì)胞NF-κ B的DNA結(jié)合活性：在CA46細(xì)胞系中，應(yīng)用特異性抑制劑PDTC阻斷NF-κ B信號(hào)通路，可引起bcl-2、survivin、c-myc、hTERT表達(dá)下調(diào)和p21表達(dá)上調(diào)，抑制CA46細(xì)胞的生

4、長(zhǎng)與增殖，并誘導(dǎo)CA46細(xì)胞凋亡，且隨著作用時(shí)間的延長(zhǎng)，效應(yīng)逐漸明顯。。 結(jié)論：CD40配基化作用可抑制CA46細(xì)胞的生長(zhǎng)增殖并誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，在CA46細(xì)胞系中存在著NF-κ B信號(hào)通路，這條信號(hào)通路可能參與影響srhCD40L介導(dǎo)cD40配基化對(duì)人類Burkitt淋巴瘤CA46細(xì)胞的增殖、凋亡作用，其作用機(jī)制可能與CD40配基化抑制了NF-κ B的活性，下調(diào)抑凋亡相關(guān)因子bcl-2、survivin、c-myc、hTERT的表