添加幾種維生素飲食對(duì)人食管癌細(xì)胞增殖影響及其機(jī)制研究.pdf

1、本研究首先觀察模擬成都成人飲食喂飼大鼠對(duì)其生長(zhǎng)的影響，初步探討用成人飲食喂飼大鼠的可行性；用喂飼常規(guī)飼料的大鼠血清培養(yǎng)人食管癌細(xì)胞，探討大鼠血清取代小牛血清培養(yǎng)細(xì)胞的可行性；從而建立飲食與食管癌研究的血清生理學(xué)方法。本研究采用血清生理學(xué)方法分別觀察成都成人飲食、鹽亭食管癌高發(fā)區(qū)病人飲食以及添加幾種維生素(組合1：維生素A、E、葉酸；組合2：維生素A、E、葉酸、核黃素、維生素C)的鹽亭飲食喂飼大鼠血清對(duì)人食管癌細(xì)胞生長(zhǎng)增殖的影響，為探討飲

2、食營(yíng)養(yǎng)因素在癌癥發(fā)生發(fā)展中的作用提供新技術(shù)，為食管癌高發(fā)區(qū)居民調(diào)整飲食結(jié)構(gòu)和食管癌高危人群制定營(yíng)養(yǎng)干預(yù)措施提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。本研究采用RT-PCR定量技術(shù)及細(xì)胞免疫熒光法，分別觀察鹽亭飲食及添加幾種維生素的鹽亭飲食喂飼大鼠血清對(duì)人食管癌細(xì)胞周期調(diào)控因子表達(dá)的影響，探討鹽亭飲食及維生素在食管癌發(fā)展中的分子機(jī)制，為尋找新的基因治療靶位提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法： (1)模擬成都成人飲食(以下簡(jiǎn)稱成都飲食)喂飼大鼠，同時(shí)設(shè)立大鼠常規(guī)飼料

3、對(duì)照組，觀察成都飲食對(duì)大鼠采食量及體重的影響，探討成人飲食喂飼大鼠的可行性。 (2)采用MTT法繪制細(xì)胞生長(zhǎng)曲線，篩選不同濃度、滅活與否的大鼠空白血清(喂飼常規(guī)飼料的大鼠血清)對(duì)人食管癌細(xì)胞的最佳作用條件；通過(guò)設(shè)立小牛血清對(duì)照以及人正常肝上皮細(xì)胞對(duì)照，進(jìn)一步完善血清生理學(xué)方法。 (3)通過(guò)MTT法繪制細(xì)胞生長(zhǎng)曲線、計(jì)算細(xì)胞群體倍增時(shí)間、<'3>H-TDR摻入實(shí)驗(yàn)測(cè)定細(xì)胞DNA合成及流式細(xì)胞術(shù)分析細(xì)胞周期，分別觀察喂飼成都

4、飲食、鹽亭飲食及添加幾種維生素(組合1：維生素A、E、葉酸；組合2：維生素A、E、葉酸、核黃素、維生素C，各設(shè)高低兩個(gè)劑量)鹽亭飲食的大鼠血清對(duì)人食管癌細(xì)胞生長(zhǎng)增殖的影響。 (4)采用RT-PCR定量技術(shù)及細(xì)胞免疫熒光法，分別探討鹽亭飲食及添加幾種維生素的鹽亭飲食喂飼大鼠血清對(duì)人食管癌細(xì)胞中參與細(xì)胞周期調(diào)控的原癌基因CyclinD1、細(xì)胞周期素依賴性激酶CDK4及抑癌基因P16、Rb在mRNA、蛋白水平表達(dá)的影響。 結(jié)果

5、： (1) 本實(shí)驗(yàn)?zāi)M成都飲食喂飼大鼠，其采食量明顯低于大鼠常規(guī)飼料組，但其體重增長(zhǎng)與大鼠常規(guī)飼料組無(wú)明顯差異，表明成都飲食對(duì)大鼠生長(zhǎng)無(wú)明顯影響。 (2)本實(shí)驗(yàn)用不同濃度、滅活與否的大鼠空白血清(喂飼常規(guī)飼料的大鼠血清)取代細(xì)胞培養(yǎng)液中傳統(tǒng)的小牛血清來(lái)培養(yǎng)人食管癌細(xì)胞，篩選出5％未滅活大鼠空白血清最適合癌細(xì)胞生長(zhǎng)。5％未滅活大鼠空白血清對(duì)人正常肝上皮細(xì)胞生長(zhǎng)的影響與小牛血清對(duì)照作用相近，提示該血清同樣適合正常細(xì)胞生長(zhǎng)。

6、 (3)細(xì)胞生長(zhǎng)曲線、細(xì)胞群體倍增時(shí)間、DNA合成及細(xì)胞周期分布結(jié)果表明，與小牛血清對(duì)照相比，鹽亭飲食喂飼大鼠血清明顯促進(jìn)人食管癌細(xì)胞生長(zhǎng)增殖、卻抑制人正常肝上皮細(xì)胞生長(zhǎng)增殖；而成都飲食喂飼大鼠血清對(duì)兩株細(xì)胞的作用均與小牛血清對(duì)照相近。添加幾種維生素的鹽亭飲食喂飼大鼠血清則逆轉(zhuǎn)了鹽亭飲食喂飼大鼠血清對(duì)兩株細(xì)胞的作用，尤以兩個(gè)維生素組合的高劑量作用較明顯。 (4)喂飼鹽亭飲食的大鼠血清處理人食管癌細(xì)胞后，細(xì)胞中原癌基因Cyc

7、linD1及CDK4在mRNA及蛋白水平均異常高表達(dá)，同時(shí)還伴有抑癌基因P16低表達(dá)，抑癌基因Rb有低表達(dá)趨勢(shì)，但變化不明顯。而添加幾種維生素的鹽亭飲食喂飼大鼠血清則逆轉(zhuǎn)了鹽亭飲食喂飼大鼠血清的作用，尤以兩個(gè)維生素組合的高劑量作用較明顯。 結(jié)論： (1)模擬成人飲食喂飼大鼠是可行的。 (2)大鼠血清取代小牛血清培養(yǎng)人食管癌細(xì)胞Eca-109是可行的。 (3) 與成都成人飲食喂飼大鼠血清相比，鹽亭食管癌高發(fā)

8、區(qū)病人飲食喂飼大鼠血清明顯促進(jìn)人食管癌細(xì)胞增殖、卻抑制人正常肝上皮細(xì)胞增殖，提示鹽亭飲食中可能存在促癌因素。 (4)添加幾種維生素(組合1：維生素A、E、葉酸；組合2：維生素A、E、葉酸、核黃素、維生素C)的鹽亭飲食喂飼大鼠血清明顯抑制人食管癌細(xì)胞增殖、卻促進(jìn)人正常肝上皮細(xì)胞增殖，逆轉(zhuǎn)了鹽亭飲食喂飼大鼠血清對(duì)兩株細(xì)胞增殖的作用，提示維生素充足時(shí)可保護(hù)上皮細(xì)胞免于致癌物攻擊，而缺乏時(shí)則可能成為促癌因素。 (5)鹽亭飲食喂飼