CXCR7-CXCR4-SDF-1軸和VEGF對脈絡膜視網膜血管內皮細胞的作用.pdf

1、脈絡膜新生血管(choroidal neovascularization，CNV)是年齡相關性黃斑變性(age-related macular degeneration，AMD)、病理性近視(pathological myopia)、中心性滲出性脈絡膜視網膜炎(central exudative chorioretinopathy, CEC)、眼組織胞漿菌病(ocular histoplasmosis syndrome，OHS)、眼部腫

2、瘤和外傷等眼部疾病致盲的重要原因[1]。CNV好發(fā)于黃斑區(qū)，常引起反復出血、滲出，繼而導致瘢痕形成，嚴重影響中心視力。目前，CNV相關的疾病的研究是眼科學領域的重點與難點。
　　新生血管形成的過程是多種促血管形成因子(angiogenic factors)和抑制血管形成因子(anti-angiogenic factors)共同調節(jié)的，正常情況下二者動態(tài)平衡。在正常血管形成的過程中，血管內皮細胞在多種因子的作用下增殖、遷移到靶組織逐

3、漸形成有序成熟的血管網。而在病理過程中，抑制血管生成和促進血管生成的動態(tài)平衡被打破，血管形成失調且導致不成熟的血管形成。
　　本研究探討了幾種血管生成相關基因在CNV形成過程中的作用，著重研究了基質細胞衍生因子-1（Stromal cell-derived factor-1，SDF-1）及其受體趨化因子受體CXCR4和近年來發(fā)現的SDF-1的新受體CXCR7對脈絡膜視網膜血管內皮細胞增殖、凋亡、遷移和管腔形成能力的影響，同時研究了

4、血管內皮生長因子(Vascular endothelial growth factor，VEGF)在缺氧條件下對脈絡膜視網膜血管內皮細胞增殖和管腔形成的影響。
　　第一部分:CXCR7/CXCR4/SDF-1軸對脈絡膜新生血管作用的體外研究
　　目的及背景:趨化因子受體CXCR4一度被認為是基質細胞衍生因子(stromalcell-derived factor-1，SDF-1)唯一的受體，二者結合后在多種病理生理過程中發(fā)揮重

5、要的作用。近年來發(fā)現了SDF-1的新受體——趨化因子受體CXCR7。本研究通過體外培養(yǎng)脈絡膜視網膜血管內皮細胞(RF/6A)，對CXCR7/CXCR4/SDF-1軸在脈絡膜新生血管中的作用進行探索。
　　方法:將RF/6A細胞置于含1％O2-94％N2-5％CO2缺氧培養(yǎng)箱中孵育，建立缺氧模型。將CXCR4-siRNA或/和CXCR7-siRNA通過脂質體2000轉染入RF/6A細胞內。采用Real-time PCR法和Weste

6、rn blot法分別檢測正常氧分壓組、缺氧模型組、CXCR4-siRNA轉染組、CXCR7-siRNA轉染組、CXCR4-siRNA聯(lián)合CXCR7-siRNA轉染組中CXCR4以及CXCR7在mRNA和蛋白質水平的表達情況。分別采用CCK-8細胞增殖分析、Transwell遷移實驗、AnnexinⅤ-FITC和碘化丙啶雙染法、Matrigel管腔形成實驗來檢測各組細胞的增殖能力、遷移能力、凋亡情況和管腔形成能力。
　　結果:在缺氧

7、培養(yǎng)條件下，RF/6A細胞中CXCR4和CXCR7在mRNA和蛋白水平表達均上調，而特異性siRNA轉染可下調CXCR4和CXCR7的表達。趨化因子受體CXCR4參與了SDF-1介導的RF/6A細胞的增殖和遷移，趨化因子受體CXCR7參與了RF/6A細胞的凋亡。CXCR4和CXCR7共同調節(jié)了RF/6A的管腔形成過程。
　　結論:CXCR7/CXCR4/SDF-1軸參與了體外培養(yǎng)的RF/6A細胞的增殖、遷移、凋亡及管腔形成過程，其

8、中CXCR4和CXCR7發(fā)揮不同的作用。
　　第二部分:血管內皮生長因子對脈絡膜視網膜血管內皮細胞增殖和管腔形成的作用及機制的研究
　　目的及背景:血管內皮生長因子（Vascular endothelial growth factor，VEGF）是一種促血管形成因子，可以介導多種病理生理學作用。本研究探討了VEGF對缺氧培養(yǎng)的脈絡膜視網膜血管內皮細胞的作用及機制。
　　方法:脈絡膜血管內皮細胞(RF/6A)經MEK抑制

9、劑(PD98059)和PI3K抑制劑(LY294002)預處理后，置于含1％O2-5％CO2-94％N2的缺氧培養(yǎng)箱中孵育。用Real-time PCR和Western blot法分析正常氧分壓培養(yǎng)組、缺氧培養(yǎng)組、通路抑制劑預處理組中VEGF在mRNA和蛋白質水平表達量的變化。采用CCK-8增殖實驗、Matrigel管腔形成實驗分析各組增殖能力和管腔形成能力。同時也檢測ERK1/2通路和PI3K/Akt通路在其中的表達情況。