胰淀素對優(yōu)降糖作用于胰島βTC3細(xì)胞ATP敏感性鉀通道的影響.pdf

1、自上世紀(jì)50年代初磺脲類降糖藥(Sulfonylurea Drug，SuD/SUs)用于臨床以來，每年約有5％～10％接受其治療的糖尿病患者產(chǎn)生藥物繼發(fā)失效，五年失效率達(dá)50％，其發(fā)生原因及機(jī)制還未明確，對此學(xué)者們從不同角度進(jìn)行了研究，其中有關(guān)胰島β細(xì)胞淀粉樣蛋白沉積導(dǎo)致胰島素分泌障礙，使SUs繼發(fā)失效的學(xué)說引起關(guān)注。胰淀素(Amylin)的生理功能尚不完全清楚，但已發(fā)現(xiàn)在高糖刺激下其分泌量遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過胰島素，局部胰淀素濃度增高成為胰島內(nèi)淀

2、粉樣蛋白形成的前提，有報道高濃度胰淀素抑制大鼠胰島細(xì)胞分泌胰島素，使SUs促胰島細(xì)胞分泌胰島素作用減弱，因此認(rèn)為胰淀素分泌異常是導(dǎo)致胰島β細(xì)胞分泌功能障礙、SUs繼發(fā)失效的原因之一。本研究應(yīng)用全細(xì)胞膜片鉗技術(shù)觀察了胰淀素對胰島βTC3細(xì)胞ATP敏感性鉀通道(ATP-sensitive Potassium Channels，K+-ATPchannels)的影響，探討其影響胰島素分泌及SUs作用的機(jī)制。 目的：應(yīng)用全細(xì)胞膜片鉗技術(shù)，

3、在單個細(xì)胞水平上觀察胰島βTC3細(xì)胞K+-ATP通道的電學(xué)特性、胰淀素對葡萄糖和SUs對該通道作用的影響。 方法：胰島βTC3細(xì)胞系復(fù)蘇后，選擇有光澤、形態(tài)良好的直徑約10-15μm的細(xì)胞進(jìn)行膜片鉗實(shí)驗。當(dāng)封接電阻達(dá)1GΩ以上時吸破細(xì)胞膜，補(bǔ)償電容、電流及串聯(lián)電阻，形成全細(xì)胞記錄模式，設(shè)置鉗制電壓為—40mV，每隔1分鐘給予細(xì)胞一系列不同去極化電壓刺激后記錄電流及圖形，在不同實(shí)驗條件觀察電流及圖形的變化。電刺激脈沖的給出及數(shù)據(jù)采

4、入等均通過Pulse軟件包和DAQ-2B數(shù)據(jù)采集接口裝置一起構(gòu)成的IBBDigitizer數(shù)字化系統(tǒng)完成，采集信號均經(jīng)5kHz濾波后輸入計算機(jī)處理，所有電流數(shù)據(jù)均經(jīng)P/N漏減處理，用t檢驗進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析，以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(-x±S)表示，P<0.05為差異顯著，P<0.01為差異極顯著。 結(jié)果： 1.建立了單個胰島βTC3細(xì)胞膜上K+-ATP通道的檢測方法：選擇出適合檢測胰島βTC3細(xì)胞膜上K+-ATP通道的細(xì)胞外液及電極

5、內(nèi)液，確定了全細(xì)胞膜片鉗實(shí)驗的參數(shù)。 2.觀察了5mmol/L葡萄糖和16.7mmol/L葡萄糖時胰島βTC3細(xì)胞膜上K+-ATP通道電流的情況以及優(yōu)降糖作用后該通道的變化：在5mmol/L葡萄糖作用下，胰島βTC3細(xì)胞膜上K+-ATP通道電流呈弱的內(nèi)向整流性質(zhì)，其電流存在時間依賴性失活，16.7mmol/L葡萄糖可使電流降低；3nmol/L優(yōu)降糖可使K+-ATP通道電流減小。 3.0.1、1、10μmol/L胰淀素對5

6、mmol/L葡萄糖條件下胰島βTC3細(xì)胞膜上K+-ATP通道的影響與對照組比無明顯變化。10μmol/L胰淀素使16.7mmol/L葡萄糖作用下的K+-ATP通道最大電流減低程度降低，與對照組相比具有統(tǒng)計學(xué)意義；10μmol/L胰淀素使3nmol/L優(yōu)降糖作用下的K+-ATP通道最大電流減低程度降低，與對照組相比具有統(tǒng)計學(xué)意義。 結(jié)論： 1.葡萄糖，優(yōu)降糖是使胰島βTC3細(xì)胞膜上K+-ATP通道關(guān)閉的物質(zhì)。 2.