菟絲子在PC12細(xì)胞中的神經(jīng)活性及作用機(jī)制研究.pdf

1、以可持續(xù)增殖的細(xì)胞系細(xì)胞或低等動(dòng)物為研究對(duì)象是一種快速而有效的藥物篩選方法.該文以利用中國(guó)豐富的天然藥物資源為目的,用大鼠嗜鉻神經(jīng)瘤細(xì)胞PC12作為模型,篩選能模擬NGF的功能誘導(dǎo)PC12細(xì)胞分化、對(duì)神經(jīng)細(xì)胞有一定保護(hù)作用的天然藥物,并對(duì)其作用機(jī)制進(jìn)行初步探索.將菟絲子干粉用75﹪乙醇浸泡后,減壓蒸干后得到褐色漿狀物,經(jīng)石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取,經(jīng)柱層析后,再用葡聚糖凝膠對(duì)有效成份進(jìn)一步純化,獲得了菟絲子中能誘導(dǎo)PC12細(xì)胞分

2、化的活性組分.在0-50mg/L范圍內(nèi),菟絲子提取物能劑量依賴地誘導(dǎo)大鼠嗜鉻細(xì)胞瘤PC12細(xì)胞分化、延伸突起.神經(jīng)分化的PC12細(xì)胞在去血清后,會(huì)啟動(dòng)細(xì)胞凋亡程序,細(xì)胞逐漸凋亡,甚至壞死.菟絲子提取物(0-20mg/L)能劑量依賴地抑制去血清引起的細(xì)胞凋亡,防止基因組DNA片段化,提高成活細(xì)胞的比例.通過比較活性氧作用細(xì)胞后的細(xì)胞活力、細(xì)胞周期、凋亡相關(guān)蛋白(p53、Bax、Bcl-2)水平以及細(xì)胞中SOD、GSH、MDA的差異,發(fā)現(xiàn)菟

3、絲子提取物對(duì)活性氧引起的細(xì)胞凋亡有一定的保護(hù)作用.它不僅能提高細(xì)胞活力,調(diào)節(jié)細(xì)胞中凋亡相關(guān)基因的表達(dá),而且還能調(diào)控細(xì)胞分裂周期,提高神經(jīng)分化的PC12細(xì)胞中SOD和GSH的含量,降低MDA水平.這些結(jié)果表明,菟絲子提取物對(duì)去血清和活性氧等外界環(huán)境因素造成的細(xì)胞損傷有一定的保護(hù)作用.用不同濃度的菟絲子提取物作用大鼠嗜鉻細(xì)胞瘤PC12細(xì)胞,研究發(fā)現(xiàn)菟絲子提取物能誘導(dǎo)PC12細(xì)胞分化.菟絲子提取物處理后的PC12細(xì)胞形態(tài)分析、免疫組化和細(xì)胞周

4、期測(cè)定結(jié)果表明,菟絲子提取物不僅能抑制細(xì)胞分裂,誘導(dǎo)細(xì)胞分化、延伸大量突起,而且能促進(jìn)神經(jīng)元再生信號(hào)蛋白GAP-43的大量表達(dá),提高乙酰膽堿脂酶(Acetylcholinesterase,AChE)的活性.在低劑量的NGF和菟絲子提取物存在條件下,菟絲子提取物能明顯地增加NGF誘導(dǎo)的PC12細(xì)胞分化;但是,在高濃度的NGF存在下這種增強(qiáng)作用并不明顯.這說明菟絲子提取物可能通過一種不同于NGF的方式與PC12細(xì)胞作用,間接地活化NGF受體