SDF-1-CXCR4信號(hào)軸在BMP9介導(dǎo)間充質(zhì)干細(xì)胞成骨分化過程中的作用研究.pdf

1、多能性間充質(zhì)干細(xì)胞(MSCs)屬于骨髓基質(zhì)前體細(xì)胞，具有向成骨細(xì)胞、成軟骨細(xì)胞、成脂細(xì)胞和成肌細(xì)胞分化的能力。前期體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)證實(shí)， BMP9為BMPs家族中誘導(dǎo)成骨分化能力最強(qiáng)的因子之一，但是BMP9誘導(dǎo)成骨分化過程中所涉及到的具體分子機(jī)制還需要深入研究。為了觀察SDF-1/CXCR4信號(hào)軸在BMP9促M(fèi)SCs成骨分化過程中的作用，我們構(gòu)建并鑒定過表達(dá)SDF-1重組腺病毒，并通過重組腺病毒技術(shù)過表達(dá)BMP9，檢測(cè)對(duì)C3H10T1/2細(xì)胞

2、中SDF-1及受體CXCR4 mRNA和蛋白表達(dá)水平的影響;同時(shí)利用重組腺病毒或中和抗體干擾SDF-1/CXCR4，與BMP9先后作用于C3H10T1/2和HS5細(xì)胞，確定CXCR4在信號(hào)通路中的作用，并通過定量和染色測(cè)定堿性磷酸酶(ALP)表達(dá)，免疫細(xì)胞化學(xué)測(cè)定骨鈣蛋白(OCN)表達(dá)，茜素紅S染色測(cè)定鈣鹽沉積，real time PCR檢測(cè)成骨相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子Runx2、Osx、Plzf和Dlx5的表達(dá)，Western blot檢測(cè)成骨分

3、化信號(hào)通路Smad和MAPK的變化，以及熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)Smad的變化。結(jié)果顯示，成功獲得過表達(dá)SDF-1的重組腺病毒Ad-SDF-1，BMP9能明顯抑制C3H10T1/2細(xì)胞中SDF-1、CXCR4的表達(dá)，且具有劑量和時(shí)間依賴性;預(yù)先干擾SDF-1/CXCR4能明顯影響由BMP9介導(dǎo)的早、中期成骨標(biāo)志物ALP、OCN及早期轉(zhuǎn)錄因子Runx2、Osx、Plzf和Dlx5的表達(dá)和Smad、MAPK信號(hào)通路相關(guān)蛋白的變化;外源性SDF-