痘苗病毒-T7 RNA聚合酶輔助的原核基因在真核細(xì)胞中的表達(dá).pdf

1、輪狀病毒(rotavirus,RV)是嬰幼兒胃腸炎的主要病原體,據(jù)統(tǒng)計全球每年死于RV感染者約611000,RV感染絕大多數(shù)發(fā)生在發(fā)展中國家。輪狀病毒屬于呼腸病毒科(Reoviridae)輪狀病毒屬(Rotavirus),是一個直徑約為70 nm,無包膜,由三層衣殼蛋白組成的正二十面體雙鏈RNA病毒。RV基因組包含11個分節(jié)段的雙鏈RNA,編碼6個結(jié)構(gòu)蛋白(VP1-VP4,VP6,VP7)和6個非結(jié)構(gòu)蛋白(NSP1-NSP6)。根據(jù)結(jié)構(gòu)

2、蛋白VP6的抗原性差異,可將已發(fā)現(xiàn)的輪狀病毒分為A-G等7個組,其中,A組為引起嬰幼兒腹瀉的主要病原體。
　　 作為RV主要結(jié)構(gòu)蛋白,VP6在維持病毒形態(tài)、病毒進(jìn)入細(xì)胞、基因組復(fù)制和組裝過程中作為一個物理受體,具有重要的生物學(xué)功能。隨著研究的不斷深入,近年發(fā)現(xiàn)VP6蛋白在免疫保護(hù)反應(yīng)方面也具有重要作用,在研制RV重組疫苗中可能具有潛在的應(yīng)用價值。重組痘苗病毒/T7 RNA聚合酶是一瞬時表達(dá)系統(tǒng),由于具有很多優(yōu)于其他表達(dá)系統(tǒng)的特點

3、而被廣泛地應(yīng)用于表達(dá)外源蛋白。
　　 在本實驗中,TB-Chen株輪狀病毒的VP6 DNA編碼片段插入到原核質(zhì)粒pETL的噬菌體T7啟動子和終止子之間,獲得重組表達(dá)質(zhì)粒pET-VP6。構(gòu)建好的重組表達(dá)質(zhì)粒pET-VP6通過脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染到真核細(xì)胞MA104中,用攜帶噬菌體T7 RNA聚合酶基因的重組痘苗病毒vTF7-3再感染,可在細(xì)胞中檢測到目的蛋白VP6的表達(dá)。研究結(jié)果還顯示,痘苗病毒vTF7-3感染后,細(xì)胞病變較快,嚴(yán)重影響了蛋