自噬促進(jìn)B16細(xì)胞由IFN-γ誘導(dǎo)的MHC-Ⅰ類分子的表達(dá).pdf

1、人類和動物腫瘤細(xì)胞表面MHC-Ⅰ類分子普遍存在下降和缺失，可能與參與MHC-Ⅰ類分子抗原提成過程中各種成分的功能失調(diào)有關(guān)，越來越多的證據(jù)表明，自噬，在維持細(xì)胞穩(wěn)態(tài)的過程中發(fā)揮著重要的作用，而且在細(xì)胞表面MHC-II類分子的表達(dá)中也起著重要的作用，但是有關(guān)自噬是否在調(diào)節(jié)MHC-Ⅰ類分子表達(dá)中起作用還鮮有文獻(xiàn)報道，本實驗旨在研究自噬對腫瘤細(xì)胞B16細(xì)胞表面MHC-Ⅰ分子的調(diào)控的作用，及這種作用是否對CTL殺傷B16細(xì)胞有一定的影響。

2、　　 本實驗首先用流式細(xì)胞術(shù)檢測了自噬增強(qiáng)劑及抑制劑對小鼠巨噬細(xì)胞MHC-Ⅰ類分子，及CD80,CD86表達(dá)量的影響，發(fā)現(xiàn)自噬對小鼠巨噬細(xì)胞MHC-Ⅰ類分子陽性率沒有明顯的影響，但自噬增強(qiáng)劑可以降低MHC-Ⅰ類分子平均熒光強(qiáng)度，自噬抑制劑則作用相反。而且自噬增強(qiáng)劑能夠降低巨噬細(xì)胞共刺激分子CD86的陽性率和平均熒光強(qiáng)度，自噬抑制劑則作用相反，對CD80的表達(dá)沒有影響。巨噬細(xì)胞轉(zhuǎn)染Mouse Atg5，Atg7和 Beclin 1 si

3、RNAs后檢測MHC-Ⅰ類平均熒光強(qiáng)度升高。在IFN-γ存在的情況下，自噬增強(qiáng)劑增加B16細(xì)胞MHC-Ⅰ類分子表達(dá)量，抑制劑則相反，B16細(xì)胞轉(zhuǎn)染Mouse Atg5，Atg7和 Beclin 1 siRNAs，MHC-Ⅰ類分子表達(dá)量與對照質(zhì)粒組相比呈下降趨勢，免疫膠體金電鏡觀察自噬增強(qiáng)劑RM處理的B16細(xì)胞，其內(nèi)自噬小體或自噬溶酶體內(nèi)有MHC-Ⅰ分子的表達(dá),然而IFN-γ和RM同時刺激則抑制這種聚集，而且，PBS處理組并沒有觀察到MH

4、C-Ⅰ分子。自噬增強(qiáng)劑和抑制劑對IFN-γ誘導(dǎo)的MHC-Ⅰ類分子抗原提成過程中LMP2，LMP7，TAP1，TAP2，Tapasin的mRNA水平?jīng)]有影響。清除B16細(xì)胞膜表面MHC-Ⅰ類分子表達(dá)及蛋白酶體的活性后，IFN-γ和自噬增強(qiáng)劑可以協(xié)同增加MHC-Ⅰ類分子的表達(dá)，自噬抑制劑則降低表達(dá)。
　　 在存在IFN-γ時，自噬增強(qiáng)劑可以增加CTL對B16細(xì)胞的殺傷能力，抑制劑則相反，穩(wěn)轉(zhuǎn)Beclin 1 –siRNA B16細(xì)胞

5、，CTL對其殺傷能力則下降。采用Realtime PCR和ELISA檢測腫瘤組織IFN-γ水平隨著接種日期增加呈先增高后下降趨勢，在接種14d時最高，腫瘤細(xì)胞MHC-Ⅰ抗原表達(dá)情況有相同趨勢。取荷瘤12d小鼠脾細(xì)胞制備CTL，經(jīng)自噬增強(qiáng)劑來預(yù)處理的荷瘤14d鼠的腫瘤組織24h，流式檢測CTL對腫瘤細(xì)胞的殺傷能力，與未處理組相比增加，而自噬抑制劑處理組則下降；荷瘤25d組則有相反的結(jié)果。荷瘤25d小鼠脾細(xì)胞制備的CTL,對經(jīng)自噬增強(qiáng)劑或抑