雌激素對CVB3誘導的NK細胞表達IFN-γ的調(diào)控.pdf

1、病毒性心肌炎(viral myocarditis，VMC)是臨床常見的心血管系統(tǒng)疾病。其中B3型柯薩奇病毒（Coxsackievirus B3，CVB3）在病毒性心肌炎的發(fā)病中扮演著重要角色。最新臨床報道證實：男性發(fā)生心肌纖維炎癥損傷的幾率顯著高于女性，表明病毒性心肌炎有顯著的性別差異。然而，對病毒性心肌炎發(fā)病的性別差異機制尚不完全清楚。因此，在細胞和分子水平上闡明病毒性心肌炎發(fā)病的性別差異的分子機制，具有重要的理論和應用意義。以CVB

2、3感染小鼠建立的心肌炎動物模型，很好的模擬了臨床上病毒性心肌炎過程。我們實驗室前期的研究結(jié)果表明，在病毒性心肌炎小鼠模型中，雄性小鼠的發(fā)病程度顯著高于雌性小鼠，且雄性小鼠心臟微環(huán)境中IFN-γ的表達是雌小鼠的5倍，并且在感染早期主要由NK細胞表達。NK細胞是VMC感染早期最主要的炎性浸潤細胞，可直接作用于病毒感染的心肌細胞，并通過分泌IFN-γ等細胞因子，進一步擴大炎性反應。為了驗證NK細胞在病毒性心肌炎中的關(guān)鍵作用，我們通過腹腔注射

3、NK細胞中和抗體anti-ASGM1干預小鼠心肌炎模型，發(fā)現(xiàn)中和抗體清除NK細胞后雄性小鼠心臟浸潤的IFN-γ的表達顯著減少，心肌炎性病狀減輕。同時我們動態(tài)監(jiān)測到雌雄小鼠感染 CVB3后心臟浸潤的 NK細胞其數(shù)量百分比沒有顯著性別差異，但是雄性小鼠心臟浸潤的NK細胞表達IFN-γ的水平要顯著高于雌性小鼠。進一步我們給雄性心肌炎小鼠注射雌激素進行干預，結(jié)果發(fā)現(xiàn)注射雌激素后，雄性小鼠心臟微環(huán)境中IFN-γ的表達水平顯著下調(diào)，提示我們雌激素可

4、能影響了心肌炎小鼠心臟浸潤NK細胞IFN-γ的表達。
　　本研究探討了病毒性心肌炎發(fā)病過程中雌激素如何調(diào)控小鼠心臟微環(huán)境中NK細胞IFN-γ的表達。為了探究雌激素在病毒性心肌炎中的重要作用，我們首先考慮到自然發(fā)育過程中，性發(fā)育不成熟的小鼠和性發(fā)育成熟雌雄小鼠在感染 CVB3后是否有不同的發(fā)病狀態(tài)。我們在構(gòu)建雄性小鼠半數(shù)致死劑量的心肌炎模型過程中發(fā)現(xiàn)，性發(fā)育不成熟（2周齡）小鼠感染CVB3后沒有顯著的性別差異，而性發(fā)育成熟（6周齡）

5、小鼠感染CVB3后具有顯著的性別差異，雄性小鼠的發(fā)病程度顯著高于雌性小鼠，并且雄性小鼠心臟浸潤的NK細胞表達IFN-γ程度顯著高于雌性小鼠。我們通過去勢手術(shù)摘除雌性小鼠的卵巢，發(fā)現(xiàn)去勢組雌性小鼠心臟炎癥明顯加重，心臟浸潤的NK細胞分泌的IFN-γ較對照組顯著上調(diào)。以上結(jié)果驗證了雌激素在調(diào)控小鼠心臟浸潤的NK細胞分泌IFN-γ過程中的重要作用。通過體外實驗探究雌激素對NK細胞分泌IFN-γ的調(diào)控。我們用雌激素和CVB3處理磁珠分選得到的N

6、K細胞，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，CVB3的刺激可上調(diào)NK細胞IFN-γ的分泌，而雌激素可抑制這一現(xiàn)象。并且我們發(fā)現(xiàn)，CVB3不能直接感染NK細胞，但是CVB3刺激可上調(diào)NK細胞IFN-γ的表達。為了探究CVB3是否直接活化NK細胞，我們在體外模擬了兩種感染過程：CVB3感染心肌細胞后，與純化的NK細胞共培養(yǎng)；CVB3直接刺激NK細胞，有趣的是，上述實驗均能上調(diào)NK細胞IFN-γ的表達。已有相關(guān)文獻報道，雌激素可通過調(diào)控活化的淋巴細胞中T-bet的表達

7、來影響IFN-γ的分泌。后續(xù)實驗我們發(fā)現(xiàn)，雌激素的刺激能夠在蛋白水平下調(diào)CVB3刺激后NK細胞分泌IFN-γ信號通路中T-bet的表達。我們由此猜測：雌激素可通過下調(diào)NK細胞T-bet表達來抑制IFN-γ的分泌?；贜K細胞在病毒性心肌炎發(fā)病過程中的重要作用，利用不同性別BALB/c小鼠對CVB3感染后病毒性心肌炎嚴重程度的差異，著重研究雌激素對NK細胞表達IFN-γ的調(diào)控在病毒性心肌炎發(fā)病過程中的作用，為闡明病毒性心肌炎發(fā)病的性別差異