重組IFN-β大腸桿菌誘導表達系統(tǒng)的建立.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的：構建大腸桿菌表達系統(tǒng)，以獲得INF-β在大腸桿菌中的表達。 方法：采用PCR擴增IFN-β基因片段，并通過EcoRI和BamHI酶切后用T<,4>DNA連接酶連接到PGEX4T-1質粒中，構建重組質粒。將重組質粒轉化入大腸桿菌DH5a，提取質粒經雙酶切鑒定正確后，再轉化入表達宿主大腸桿菌BL21菌株。通過IPTG誘導IFN-β大量表達，表達蛋白經過SDS-PAGE檢測。 結果：IFN-β基因的PCR產物通過瓊脂糖凝

2、膠電泳分析可見存在500bp左右的區(qū)帶，證明IFN-β基因的PCR結果成功。pGEX4T-1空質粒經酶切后大小由4.3Kb減小為4Kb的大片斷；重組質粒轉染大腸桿菌，經培養(yǎng)后提取的質粒經酶切后發(fā)現(xiàn)有2個片斷，一個4Kb，另一個500bp左右；提取的質粒經PCR以后也檢出500bp左右的區(qū)帶。以上三個檢測結果證明重組成功。培養(yǎng)轉染重組質粒的EcoliBL21，通過SDS-PAGE檢測出菌體粉碎提取液中存在一個46KD的蛋白質，而陰性菌體沒

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