廣州管圓線蟲分泌蛋白基因AC16的克隆表達(dá)及免疫學(xué)鑒定.pdf

1、中山大學(xué)碩士學(xué)位論文廣州管圓線蟲分泌蛋白基因AC16的克隆表達(dá)及免疫學(xué)鑒定姓名：李正宇申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：病原生物學(xué)指導(dǎo)教師：吳忠道20090605中山大學(xué)碩士學(xué)位論文◇研究目的在前期工作的基礎(chǔ)上，對(duì)可能的廣州管圓線蟲分泌蛋白基因ACl6進(jìn)行克隆表達(dá)，并對(duì)其免疫學(xué)特性進(jìn)行了初步驗(yàn)證，為開展進(jìn)一步對(duì)廣州管圓線蟲功能蛋白的研究提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。研究方法1候選基因的序列分析及生物學(xué)鑒定11候選基因的生物信息學(xué)分析隨機(jī)挑取廣卅I管圓線蟲成蟲cD

2、NA文庫(kù)的單個(gè)噬菌斑，采用多聚酶鏈反應(yīng)(PCR)技術(shù)擴(kuò)增出候選噬菌斑的插入片段，運(yùn)用直接測(cè)序技術(shù)測(cè)定插入cDNA片段的核苷酸序列，經(jīng)編輯后的序列通過(guò)NCBI(TheNationalCenterforBiotechnologyInformation)數(shù)據(jù)庫(kù)中的ORFfinder查找核酸開放閱讀框(Openreadingframe，ORE)，并推測(cè)相應(yīng)氨基酸序列，然后用BLAST(BasicLocalAlignmentSearchT001)

3、進(jìn)行同源性分析，使厙]http：／／caexpasyorg／tools暖J站的分析軟件對(duì)蛋白進(jìn)行結(jié)構(gòu)分析與功能預(yù)測(cè)。12候選基因的基因結(jié)構(gòu)分析121候選基因的mRNA轉(zhuǎn)錄水平分析(RTPcR)提取廣州管圓線蟲成蟲以及四期幼蟲總RNA并反轉(zhuǎn)錄合成相應(yīng)的eDNA，采用RTPCR對(duì)候選編碼基因在不同蟲期的相對(duì)表達(dá)水平進(jìn)行分析。122候選基因DNA和mRNA序列的差異提取廣州管圓線蟲的基因組DNA，以候選基因的特異性引物進(jìn)行PCR，擴(kuò)增得到的序