靶向整合素β1(ITGB-1)的RNAi對(duì)胰腺癌細(xì)胞株P(guān)ANC-1生物學(xué)特性的影響.pdf

1、目的:檢測(cè)胰腺癌組織中整合素β1(ITGB1)的表達(dá)，并分析其臨床意義。轉(zhuǎn)染靶向ITGB1基因的小干擾RNA片段，并研究其對(duì)胰腺癌低分化細(xì)胞株P(guān)ANC-1的ITGB1表達(dá)的抑制作用及對(duì)該細(xì)胞侵襲能力、增殖活性、凋亡率、藥物敏感性等特性的影響。為進(jìn)一步研究胰腺癌的侵襲轉(zhuǎn)移、耐藥及治療等在一定程度上奠定基礎(chǔ)。 方法:①免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)28例胰腺癌組織及14例正常胰腺組織標(biāo)本中ITGB1蛋白的表達(dá)，比較其差異，分析ITGB1的表達(dá)

2、量與胰腺癌分化程度、組織類型、淋巴轉(zhuǎn)移情況的關(guān)系。②設(shè)計(jì)制備多對(duì)針對(duì)ITGB1基因的小干擾RNA(smallinterferingRNA，siRNA)，通過(guò)陽(yáng)離子脂質(zhì)體Lipofectamine2000轉(zhuǎn)染胰腺癌低分化細(xì)胞株P(guān)ANC-1，流式細(xì)胞儀檢測(cè)轉(zhuǎn)染效率，采用實(shí)時(shí)定量PCR(RQ-PCR)法測(cè)定轉(zhuǎn)染后PANC-1細(xì)胞ITGB1及內(nèi)參ab1的mRNA表達(dá)、測(cè)算干擾效率、檢測(cè)干擾效果維持時(shí)間、篩選出最有效siRNA，WesternBl

3、ot法測(cè)定轉(zhuǎn)染后PANC-1細(xì)胞ITGB1蛋白的表達(dá)。③對(duì)于轉(zhuǎn)染后PANC-1細(xì)胞，用Transwell小室試驗(yàn)檢測(cè)其侵襲能力、MTT法檢測(cè)其增殖活性、AnnexinV/PI雙染法檢測(cè)其在有與無(wú)5-Fu作用下的早期凋亡率、MTT法檢測(cè)在梯度濃度的5-Fu作用下的細(xì)胞存活率。 結(jié)果:①胰腺癌組織中整合素β1表達(dá)明顯較正常胰腺組織高，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的胰腺癌組織整合素β1表達(dá)顯著升高，分期較高的胰腺癌組織整合素β1表達(dá)亦顯著升高。②細(xì)胞

4、數(shù)約為每孔2.0×105個(gè)、siRNA濃度約為50nmol/L時(shí)，有較佳的轉(zhuǎn)染效率，繼續(xù)提高siRNA濃度并不能明顯提高轉(zhuǎn)染效率；s1RNA3導(dǎo)致的ITGB1mRNA表達(dá)降低最為顯著，干擾效率最高；轉(zhuǎn)染效果能夠至少維持至轉(zhuǎn)染后的96h；轉(zhuǎn)染了siRNA3后48h的PANC-1細(xì)胞ITGB1蛋白的表達(dá)量有所減少。③轉(zhuǎn)染了siRNA3的PANC-1細(xì)胞，在體外的侵襲能力明顯減弱，增殖活性及細(xì)胞凋亡率無(wú)明顯影響；但在5-Fu作用下，其細(xì)胞凋亡