補腎益氣方調(diào)控人早孕滋養(yǎng)細胞SOCS3表達改善其生物學功能的研究.pdf

1、v955卵0鍰旦大學博士學位論文補腎益氣方調(diào)挫人早孕滋養(yǎng)細胞SOCs3表達陡善其生物學功能的研究院奇姓系業(yè)名婦產(chǎn)科醫(yī)院婦產(chǎn)科學邢&英指導教師：塑塹墨塑堡完成日期：!!Q至!旦!!旦中文摘要絨毛／蛻膜陽性率342％／316％，絨毛組織及蛻膜組織SOCSl、SOCS2、SOCS3基因多為中、低表達，SOCS蛋白表達特征與轉(zhuǎn)錄水平基本一致。SOCSl、SOCS2、SOCS3蛋白分布于絨毛滋養(yǎng)細胞全層，散在分布于蛻膜問質(zhì)；滋養(yǎng)細胞和蛻膜細胞表達

2、的SOCS蛋白既可以分布在細胞漿內(nèi)，也可以分布在細胞核內(nèi)，或者兼而有之。(2)體外分離人早孕細胞滋養(yǎng)細胞和蛻膜基質(zhì)細胞，予1％胎牛血清的DMEMF12培養(yǎng)14h，兩種細胞均表達SOCS2、SOCS3基因；同時細胞滋養(yǎng)細胞、蛻膜基質(zhì)細胞分泌的IL10，高于同種細胞培養(yǎng)2h時的分泌水平(PO05)。(3)IL10(01ng／m1)可上調(diào)細胞滋養(yǎng)細胞、蛻膜基質(zhì)細胞SOCS2、SOCS3基因表達。結(jié)論正常母胎界面表達SOCSl、SOCS2、SO

3、CS3，細胞滋養(yǎng)細胞和蛻膜基質(zhì)細胞自分泌和旁分泌IL10可能是母胎界面表達SOCS2、SOCS3的誘因之一，SOCS可能參與母胎界面免疫內(nèi)分泌網(wǎng)絡的調(diào)節(jié)，進一步研究SOCS的生物學功能將為了解復雜的妊娠機制提供有價值的信息。第二部分補腎益氣方促進人細胞滋養(yǎng)細胞SOCS3表達及其生長目的檢測補腎益氣方對原代培養(yǎng)人早孕細胞滋養(yǎng)細胞及人滋養(yǎng)細胞腫瘤JAR細胞株SOCS3表達的調(diào)控，探討中藥促進細胞滋養(yǎng)細胞生長的作用機制。方法采用Pereoll

4、密度梯度離心法，分離純化人正常早孕細胞滋養(yǎng)細胞，免疫細胞化學鑒定其純度；RTPCR法檢測細胞滋養(yǎng)細胞SOCS3基因表達；Westemblot檢測細胞滋養(yǎng)細胞SOCS3蛋白表達、STAT3活化及ERK磷酸化的變化；MTT法檢測人細胞滋養(yǎng)細胞、JAR細胞株增殖活力；PCNA—PE單標志流式細胞術(shù)分析細胞增殖情況、AnnexinVFITC／PI雙標記流式細胞術(shù)分析細胞早期凋亡；用SOCS3特異性的siRNA轉(zhuǎn)染JAR細胞，realtimePC

5、R等法驗證轉(zhuǎn)染效果，檢測轉(zhuǎn)染后細胞ERKl／2的活化及STAT3的磷酸化；用SOCS3正義基因轉(zhuǎn)染JAR細胞，促進SOCS3表達，PCNA—PE單標志流式細胞術(shù)分析細胞增殖變化。結(jié)果(1)10％和20％牢b腎益氣方含藥血清呈濃度依賴性增強人正常早孕細胞滋養(yǎng)細胞增殖活力及PCNA表達：中藥對JAR細胞株有類似作用。1％胎牛血清培養(yǎng)細胞滋養(yǎng)細胞48h，AnnexinVFITCPI一細胞為3819a：745％，加入10％和20％中藥處理后，滋