人羊膜細胞具有向心肌樣細胞分化的特性.pdf

1、目的：心肌成形術(CCM)為治療因心肌細胞受損而導致的心臟功能衰退提供了理想的途徑。人羊膜細胞可能成為CCM的細胞來源。然而，人羊膜細胞中的上皮細胞(hAECs)和間充質細胞(hAMCs)向心肌細胞的分化潛能及其體外誘導的影響因素均尚待進一步探討。本研究試圖通過體外誘導分化實驗，以評價hAECs和hAMCs向心肌細胞分化的能力，為人羊膜細胞作為CCM的細胞來源提供實驗依據(jù)。 方法：①采用胰蛋白酶一膠原酶分離法分離hAECs和hA

2、MCs，用流式細胞儀(FCM)進行表型鑒定。②hAECs和hAMCs均用10μmol/L 5-氮雜胞苷(5-aza)誘導24h，隨后hAECs用含抗壞血酸磷酸鹽和5％胎牛血清的培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)；而hAMCs用含堿性成纖維細胞生長因子(bFGF)和5％胎牛血清的培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。③分別取誘導后第12d的hAECs和誘導后第8d的hAMCs，采用RT-PCR檢測心肌特異性轉錄因子Nkx2.5和GATA-4 mRNA的表達。④取誘導后2周、4周的

3、hAECs和hAMCs，用免疫熒光染色法檢測肌細胞特異蛋白α-輔肌動蛋白和結蛋白的表達。 結果：①通過胰蛋白酶和膠原酶消化可分離較高豐度的人羊膜細胞，每份羊膜可獲得5.01×10<'7>hAECs和6.30×10<'7>hAMCs；FCM分析顯示hAECs幾乎不表達CD44，而hAMCs中有26.6％表達CD44。②hAECs經(jīng)5-aza和抗壞血酸誘導后，表達肌系細胞標志結蛋白和α-輔肌動蛋白，有心肌特異性轉錄因子Nkx2.5和