小鼠皮膚切創(chuàng)愈合過(guò)程中FAK和磷酸化FAK表達(dá)及其時(shí)間規(guī)律性變化的研究.pdf

1、目的： 皮膚損傷愈合大致分為三個(gè)階段，即炎癥期、纖維增生期和組織重建期。多核粒細(xì)胞、單核細(xì)胞和成纖維細(xì)胞參與皮膚損傷愈合的全過(guò)程，清除損傷、壞死的皮膚組織和入侵的病原體并重建損傷組織，對(duì)于損傷愈合具有重要作用。在炎癥期和纖維增生期損傷區(qū)內(nèi)多核粒細(xì)胞、單核細(xì)胞和成纖維細(xì)胞的數(shù)量急劇增加；在組織重建期，這三種細(xì)胞的數(shù)量則顯著減少，直至傷口完全愈合。 粘著斑激酶(focal adhesion kinase，F(xiàn)AK，也稱(chēng)pp<'

2、125FAK>)是人們最初在用v-src轉(zhuǎn)化細(xì)胞時(shí)發(fā)現(xiàn)的一個(gè)主要酪氨酸磷酸化蛋白，是整合素信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)中的關(guān)鍵分子之一，在細(xì)胞粘附過(guò)程中發(fā)揮著非常重要的作用。當(dāng)被整合素激活時(shí)FAK自身磷酸化，能夠直接或者通過(guò)相關(guān)激酶激活PI-3K(plaosphatidylinositol 3-kinase，PI-3K)、MAPK(mitogen-activated protein kinase，MAPK)和STAT(signal transduceran

3、d activator of transcription，STAT)等信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)分子，進(jìn)而與細(xì)胞內(nèi)一些相關(guān)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑相聯(lián)系，參與細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)過(guò)程。這些細(xì)胞內(nèi)分子的相互作用在信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑中調(diào)節(jié)各種各樣的細(xì)胞功能，如擴(kuò)散、遷移、增殖、凋亡和細(xì)胞的存活。 本研究用免疫組織化學(xué)染色技術(shù)和Westem blot方法檢測(cè)小鼠皮膚切創(chuàng)愈合過(guò)程中FAK和磷酸化FAK在多核粒細(xì)胞、單核細(xì)胞及成纖維細(xì)胞中的表達(dá)，進(jìn)而探討通過(guò)FAK的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑及

4、其生物學(xué)作用，并討論通過(guò)檢測(cè)FAK和磷酸化FAK表達(dá)的規(guī)律推測(cè)皮膚損傷時(shí)間的可行性，進(jìn)一步揭示蛋白質(zhì)的磷酸化對(duì)皮膚損傷愈合的影響。 方法: 1、動(dòng)物模型的建立及分組 2、FAK和磷酸化FAK的免疫組織化學(xué)染色(SP法) 3、陽(yáng)性細(xì)胞計(jì)數(shù)分析 4、FAK和磷酸化FAK的Western blot檢測(cè) 結(jié)論: 1、正常皮膚的表皮層、毛囊、皮脂腺和血管內(nèi)皮中表達(dá)FAK及磷酸化FAK，提示F

5、AK在生理狀態(tài)下就發(fā)揮生物學(xué)作用。 2、小鼠皮膚切創(chuàng)愈合過(guò)程中，F(xiàn)AK和phospho-FAK在多核粒細(xì)胞、單核細(xì)胞及成纖維細(xì)胞中表達(dá)，并且在小鼠皮膚切創(chuàng)愈合過(guò)程中，F(xiàn)AK對(duì)于多核粒細(xì)胞和單核細(xì)胞的聚集、遷移及成纖維細(xì)胞的增殖起著重要作用。 3、在小鼠皮膚切創(chuàng)愈合過(guò)程中，F(xiàn)AK和phospho-FAK陽(yáng)性細(xì)胞率呈時(shí)間規(guī)律性變化，表明FAK和phospho-FAK可作為推斷皮膚切創(chuàng)損傷時(shí)間的指標(biāo)，且phospho-FAK要