人外周血平滑肌祖細(xì)胞與成熟血管平滑肌細(xì)胞生物學(xué)特性比較.pdf

1、目的:探討成人外周血來源的平滑肌祖細(xì)胞(smooth muscle progenitorcells,SPCs)與成熟血管平滑肌細(xì)胞(smooth muscle cells,SMCs)細(xì)胞形態(tài)、增殖潛能等方面的異同點(diǎn),為血管組織工程提供可靠的種子細(xì)胞來源。
　　 方法:1、密度梯度離心法分離成人外周血中單個(gè)核細(xì)胞,于用纖粘連蛋白包被的含血小板衍生生長(zhǎng)因子BB(Platelet derived growth factorBB,PDG

2、F-BB)和EGM-2培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中誘導(dǎo)培養(yǎng),觀察細(xì)胞形態(tài)變化,常規(guī)換液、傳代、凍存及復(fù)蘇。
　　 2、通過手術(shù)取得實(shí)驗(yàn)用大隱靜脈3cm,采用膠原蛋白酶消化、差異貼壁法原代培養(yǎng),含PDGF-BB的EGM-2培養(yǎng)基培養(yǎng),觀察細(xì)胞形態(tài),獲得平滑肌細(xì)胞。
　　 3、平滑肌祖細(xì)胞及平滑肌細(xì)胞分別進(jìn)行細(xì)胞爬片,應(yīng)用細(xì)胞免疫熒光檢測(cè)平滑肌肌動(dòng)蛋白(α-SMA)和調(diào)寧蛋白(calponin1)的表達(dá)。
　　 4、用RT-PC

3、R檢測(cè)平滑肌肌動(dòng)蛋白(alpha-smooth muscle actin,a-sma)和調(diào)寧蛋白(calponin1,cap)的mRNA表達(dá)。
　　 5、MTT(四唑鹽比色實(shí)驗(yàn))分別檢測(cè)第6代平滑肌祖細(xì)胞與平滑肌細(xì)胞的增殖能力。
　　 結(jié)果:1、SPCs傳代細(xì)胞培養(yǎng)達(dá)80-90％融合時(shí),呈螺旋狀排列,并可呈典型“峰、谷”樣形態(tài),符合平滑肌細(xì)胞形態(tài)學(xué)特征。
　　 2、平滑肌祖細(xì)胞可表達(dá)平滑肌細(xì)胞特異性標(biāo)記α-SMA