利用腸癌特異性A33啟動(dòng)子介導(dǎo)的溶瘤病毒拾腸癌特異的抑癌基因ST13靶向基因病毒治療結(jié)腸癌研究.pdf

1、)；j{浙江理工大學(xué)學(xué)位論文原創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明：我恪守學(xué)術(shù)道德，崇尚嚴(yán)謹(jǐn)學(xué)風(fēng)。所呈交的學(xué)位論文，是本人在導(dǎo)師的指導(dǎo)下，獨(dú)立進(jìn)行研究工作所取得的成果。除文中已明確注明和引用的內(nèi)容外，本論文不包含任何其他個(gè)人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫(xiě)過(guò)的作品及成果的內(nèi)容。論文為本人親自撰寫(xiě)，我對(duì)所寫(xiě)的內(nèi)容負(fù)責(zé)，并完全意識(shí)到本聲明的法律結(jié)果由本人承擔(dān)。學(xué)位論文作者簽名：日期： 年 月 日浙江理工大學(xué)碩士學(xué)位論文利用腸癌特異性A 3 3 啟動(dòng)子介導(dǎo)的溶瘤病毒攜帶

2、腸癌特異的抑癌基因S T l 3 靶向基因病毒治療結(jié)腸癌研究摘要結(jié)腸癌在我國(guó)的發(fā)病率有逐年上升趨勢(shì)，目前的傳統(tǒng)治療方法對(duì)不能手術(shù)切除的結(jié)腸癌效果欠佳，因此，積極探索新的結(jié)腸癌治療方法具有重要意義。癌癥的靶向基因．病毒治療策略( c a n c e r t a r g e t i n gG e n e - v i r o - t h e r a p y ) 已經(jīng)成為一個(gè)研究熱點(diǎn)。目前，實(shí)現(xiàn)腫瘤基因．病毒的靶向性治療主要是通過(guò)腫瘤組織特異性

3、的啟動(dòng)子來(lái)調(diào)控病毒載體或治療基因，從而使得重組基因．病毒對(duì)細(xì)胞的殺傷具有腫瘤選擇性。G P A 3 3 ( g l y c o p r o t e i n A 3 3 ，A 3 3 ) ，是一個(gè)4 3k D a 大小的跨膜糖蛋白，H e a t h 等在1 9 9 7 年發(fā)現(xiàn)其在9 5 ％以上的原發(fā)和轉(zhuǎn)移結(jié)腸癌中過(guò)表達(dá)，且N o r t h e r n b l o t 分析顯示2 ．8K b 大小的A 3 3 m R N A 只有在結(jié)腸

4、癌細(xì)胞系中顯示A 3 3 抗原陽(yáng)性，在其他組織中幾乎沒(méi)有表達(dá)。因此將糖蛋白A 3 3 基因的啟動(dòng)子應(yīng)用于靶向基因．病毒治療平臺(tái)，可能具有極好的結(jié)腸癌組織特異性。在本研究中，首先通過(guò)構(gòu)建A 3 3 核心啟動(dòng)子和帶S V 4 0 增強(qiáng)子的A 3 3 核心啟動(dòng)子( e A 3 3 ) 的熒光素酶報(bào)告基因載體p G L 3 ．A 3 3 和p G L 3 - e A 3 3 ，與內(nèi)參照p R L ．S V 4 0 質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染至不同的細(xì)胞系中，利

5、用雙熒光素酶檢測(cè)系統(tǒng)檢測(cè)分析了A 3 3 和e A 3 3 啟動(dòng)子在不同細(xì)胞系中的轉(zhuǎn)錄活性。結(jié)果顯示，A 3 3 核心啟動(dòng)子在結(jié)腸癌細(xì)胞系中具有轉(zhuǎn)錄活性低但結(jié)腸癌特異性好的特點(diǎn)，而在其他類型癌細(xì)胞中基本沒(méi)有活性。同時(shí)發(fā)現(xiàn)，e A 3 3 在各類癌細(xì)胞中的轉(zhuǎn)錄水平與A 3 3 相比，均呈大幅度提高，有顯著性差異( P < 0 ．0 1 ) ，但S V 4 0 增強(qiáng)子能顯著增強(qiáng)A 3 3 啟動(dòng)子轉(zhuǎn)錄活性的同時(shí)減低了其結(jié)腸癌特異性。因而

6、我們選擇了A 3 3 核心啟動(dòng)子構(gòu)建重組病毒，使用結(jié)腸癌特異性A 3 3 啟動(dòng)子代替病毒E 1 A 基因的啟動(dòng)子，刪除病毒E 1 B 蛋白基因，構(gòu)建出結(jié)腸癌特異性增殖腺病毒載體A d ．A 3 3 ．E 1 A ．A E l B ，期望達(dá)到雙重靶向殺傷結(jié)腸癌細(xì)胞，并提高其對(duì)正常細(xì)胞的安全性的治療效果。治療基因的選擇是腫瘤的靶向基因．病毒治療取得成功的關(guān)鍵之一。為增強(qiáng)溶瘤腺病毒對(duì)腫瘤細(xì)胞的殺傷達(dá)到更佳效果，我們利用S T l 3 ( s