LC3A在食管鱗癌中的放化療敏感性預測作用.pdf

1、第一部分微管相關蛋白LC3A在食管鱗癌中的表達及意義
　　 研究背景及目的:自噬是指細胞內需降解的長壽命蛋白質和細胞器等胞漿成分被包裹，并運送至溶酶體降解的過程，自噬性降解產(chǎn)生的氨基酸和其他一些小分子物質可被循環(huán)利用或產(chǎn)生能量。巨自噬即通常所指自噬。自噬從酵母到人是高度保守的。自噬這一從酵母到哺乳動物高度保守細胞死亡方式的基礎作用在于維持細胞內環(huán)境穩(wěn)定，但在生長因子缺乏、非折疊蛋白聚集、營養(yǎng)缺乏等不良刺激下，自噬作用被誘導增強。

2、自噬常常作為不良應激的反應機制發(fā)揮有利于細胞存活的保護作用。大量研究已證實自噬參與了腫瘤發(fā)生、發(fā)展，其在腫瘤治療中的作用越來越受到重視。目前研究發(fā)現(xiàn)自噬在腫瘤細胞“存與亡”中發(fā)揮著重要作用，但腫瘤細胞自噬激活后導致完全不同的結果，有時導致腫瘤細胞存活，而有時促進腫瘤細胞死亡，其原因可能是由于誘導自噬增強的應激類型的不同和腫瘤類型的差異。然而，多數(shù)研究認為自噬發(fā)揮著使腫瘤細胞抵抗不良應激，有助于腫瘤細胞存活的作用。進一步研究顯示自噬激活也

3、是腫瘤細胞抵抗藥物毒性、抵抗電離照射的重要機制之一。所以，抑制自噬則成為抗腫瘤治療的潛在靶點。微管相關蛋白輕鏈3(Microtubule-associated protein light chain3，MAPLC3A/LC3A)是自噬體重要組成部分，LC3蛋白在細胞內存在兩種形式:LC3-Ⅰ和它的蛋白水解物LC3-Ⅱ，LC3在自噬過程中發(fā)揮重要作用，其表達及由LC3-Ⅰ到LC3-Ⅱ的轉化與自噬活性相關，且與腫瘤預后相關。LC3有三種亞型

4、，LC3A，LC3B，LC3C。LC3A作為LC3的重要亞型，被證明是自噬激活的重要標志且與肺癌、結直腸癌等多種腫瘤預后相關。LC3A在食管鱗癌(Esophagealsquamous cell carcinoma，ESCC)的表達及意義未見報道。該研究通過分析LC3A在ESCC組織中表達及其與臨床病理因素、預后的關系，旨在探索ESCC預后指標并為制定ESCC個體化治療提供依據(jù)，進一步提高食管鱗癌治療效果。
　　 資料與方法:根據(jù)

5、病案資料選取濱州醫(yī)學院附屬醫(yī)院2005年1月至2008年12月間收治的食管鱗癌根治術病例243例。所有患者手術前未行任何抗腫瘤治療，手術為根治性手術。其中Ⅱ/Ⅲ(TanyN+M(0) or T3,4NanyM(0))期患者209例，158例術后行以放療為主的輔助治療。對于同步放化療患者，順鉑聯(lián)合氟尿嘧啶(Cisplatin and fluorouracil, DF)方案為同步化療方案。放療/放化療后序貫化療方案包括DF方案和紫杉類藥物聯(lián)

6、合順鉑(Taxanes and cisplatin，TP)方案。免疫組化方法(Immunohistochemistry，IHC)檢測石蠟包埋腫瘤組織中LC3A及P53蛋白表達，根據(jù)LC3A蛋白表達強弱，分為高表達及低表達。分析LC3A蛋白在ESCC中表達模式及其與重要自噬凋亡共同調節(jié)基因p53蛋白表達關系，以及LC3A表達在ESCC臨床病理因素及預后中的作用。
　　 結果:1.LC3A在食管鱗癌組織中呈現(xiàn)胞漿內彌漫性表達，LC3

7、A陽性率為52.7％。
　　 2.LC3A表達與年齡、性別、體重減輕及腫瘤位置、腫瘤侵犯深度、分期及淋巴結轉移無明顯相關性。
　　 3.LC3A與p53蛋白在ESCC中表達為獨立事件，無關聯(lián)性(p=0.9772)。
　　 4.LC3A低表達ESCC組3、5年局部控制率分別為58.2、47.0％，而LC3A高表達組3、5年局部控制率則分別為46.1％、39.5％。LC3A低表達組與高表達局部控制率差異無統(tǒng)計學意義(

8、p=0.082)，但LC3A低表達組局部控制率有高于LC3A高表達組傾向。
　　 5.LC3A低表達組3、5年總生存率分別為49.2％、30.5％, LC3A高表達組3、5年總生存率分別為41.7％、26.5％，LC3A表達同預后無關;COX單因素及多因素分析顯示T分期、N分期、臨床分期、手術根治性及術后輔助治療與預后相關，LC3A非獨立預后因素。
　　 6.將243例患者中209例Ⅱ/Ⅲ期(TanyN+M(0) or

9、T3,4NanyM(0))患者進行亞組分析發(fā)現(xiàn)，對于未行術后放療51例患者，LC3A高低表達兩組預后差異無統(tǒng)計學意義。而對于158例行術后放療為主輔助治療者，LC3A低表達者預后明顯優(yōu)于LC3A高表達者(p＜0.05)。158例術后行放療為主輔助治療Ⅱ/Ⅲ期病例進一步亞組分析發(fā)現(xiàn)， LC3A High+RT組局部控制率低于LC3A Low+RT組，差異有統(tǒng)計學意義(p=0.01)。
　　 結論:LC3A在ESCC組織中呈彌漫胞漿

10、表達，其表達與浸潤深度、淋巴結轉移情況及分期無關。放療為主的術后輔助治療在LC3A低表達患者中獲益更大，其局部控制率及總生存率高于LC3A高表達ESCC，提示LC3A表達水平與術后放療療效相關。
　　 第二部分DC方案聯(lián)合放療治療非手術ESCC療效評價及微管相關蛋白LC3A對放化療敏感性的預測作用
　　 研究背景及目的:食管癌為最常見惡性腫瘤之一，其發(fā)病率高，預后差。包括我國在內的發(fā)展中國家中，食管癌更為常見，我國每年大

11、約15萬人死于食管癌，占世界食管癌死亡病例40％以上。早期食管癌給以根治性手術后可以獲得較好的預后，而對于多數(shù)中晚期食管癌患者而言，單純手術5年生存率僅20％左右。同步放化療是非手術局部晚期食管癌標準治療模式。作為治療非手術食管癌的重要初始治療手段，其5年生存率僅為30％左右，局部復發(fā)為最常見治療失敗原因，局部未控和復發(fā)率高達20-80％。且單一提高放射治療劑量并未改善患者預后，優(yōu)化同步化療方案是進一步提高療效的重要途徑。近年來基于第三

12、代化療藥物作為同步化療方案的治療模式得到逐步探索。研究已初步證實紫杉類聯(lián)合鉑類作為同步化療方案治療食管癌的可行性，初步研究顯示有效，但耐受性不一，故化療藥物劑量及用法尚需進一步探討。同一部位腫瘤，甚至相同分化程度、相同組織來源腫瘤對于放化療敏感性存在差異，說明腫瘤細胞內在分子生物學特性影響了放射敏感性。腫瘤生物學行為預測指標是目前腫瘤研究的熱點之一。盡管控制食管癌發(fā)病、決定其生物學行為的具體基因及確切機制尚未明確，但大量研究已證實涉及細

13、胞周期調節(jié)、凋亡、DNA損傷修復機制、生長因子的許多基因突變及表達異常與腫瘤發(fā)生、發(fā)展密切有關，如p53、p21、Cyclin D、BRCA1、HIF-1等。近年來，自噬在食管鱗癌中的作用備受關注。體外實驗研究顯示抑制自噬功能，能夠提高食管鱗癌細胞的放射敏感性，證實自噬在腫瘤細胞抵抗照射中起到保護腫瘤細胞的作用。研究顯示LC3A作為重要自噬相關蛋白，在包括肺癌、結直腸癌在內多種腫瘤中廣泛高表達，且與腫瘤預后相關。第一部分研究發(fā)現(xiàn)微管相關

14、蛋白LC3A高表達食管鱗癌患者術后放化療/放療后局部控制率低于LC3A低表達者，提示LC3A表達同食管癌對放化療敏感性有關。該部分旨在通過研究LC3A表達與食管鱗狀細胞癌放化療療效之間的關系，探索LC3A蛋白表達在食管鱗癌放化療敏感性中的作用。同時觀察多西他賽順鉑(Docetaxel and cisplatin，DC)方案小劑量多次化療聯(lián)合放療治療食管鱗癌的可行性。
　　 資料與方法:自2011年11月至2012年10月，濱州醫(yī)

15、學院附屬醫(yī)院腫瘤科收治非手術食管癌患者65例。所有入組患者胃鏡活檢病理確診為食管鱗癌，KPS評分不小于80分，無手術指證或者患者拒絕手術，且無放化療禁忌。根據(jù)中國非手術治療食管癌臨床分期專家小組制定的“非手術治療食管癌臨床分期”系統(tǒng)分期。該組患者中位年齡62.1歲（42～70歲）。三維適形技術常規(guī)分割放療，放療中位劑量56.5Gy(44Gy～60Gy)。同步行DC方案化療，多西他賽20mg/m2，順鉑25mg/m2于d1、d8、d15、

16、d26、d33、d40給藥。根據(jù)進食困難緩解作為主觀療效評價，食管鋇餐造影作為客觀療效評價。并根據(jù)CTCAE3.0評估治療中毒副反應。免疫組化方法檢測食管癌活檢組織中LC3A蛋白表達情況。分析DC方案聯(lián)合放療在ESCC中的近期療效及耐受性，并分析LC3A同ESCC放化療近期療效的關系。
　　 結果:
　　 1.(1) DC方案為基礎的同步放化療治療非手術ESCC患者，主觀有效率即進食困難緩解率為88.7％（55/62）。

17、評分為0分，即無進食吞咽困難患者由治療前3.1％（2/65）增加至50.0％(32/64)。
　　 (2)DC方案化療聯(lián)合放療治療ESCC患者，食管鋇餐造影評價完全緩解率(CR)48.4％(31/64)，部分緩解率(PR)為42.2％(27/64)，客觀有效率(ORR)為90.6％(58/64)。
　　 2.放射性食管炎及粒細胞減少是基于DC方案同步放化療的最常見副反應。95.4％（62/65）患者出現(xiàn)放射性食管炎，輕度

18、（1/2度）發(fā)生率為73.9％(48/65)，3度放射性食管炎發(fā)生率為21.5％（14/65）。粒細胞減少發(fā)生率為61.6％(40/65)，但多數(shù)為輕度（1/2度）粒細胞減少癥，重度（3度以上）粒細胞減少癥發(fā)生率為3.1％(2/65)。
　　 3.LC3A低表達組ESCC患者CR率為58.1％（18/31），明顯高于LC3A高表達組38.2％（13/34），二者差異有統(tǒng)計學意義(p＜0.001)。
　　 結論:基于DC方