FLT3-L-GM-CSF對DC細胞的體外刺激以及DC-CIK體外培養(yǎng)方法的研究.pdf

1、目的：隨著細胞免疫學和分子生物學的發(fā)展，細胞免疫治療已在臨床實驗中開展，并取得一定的療效。細胞因子誘導的殺傷細胞(cytokine induced killer cells，簡稱CIK)作為一種新型免疫活性細胞，已經(jīng)用于多種惡性腫瘤的過繼免疫治療中。樹突狀細胞(dendritic cells，簡稱DC)是迄今發(fā)現(xiàn)的功能最強的抗原提呈細胞(APC)，它通過處理、提呈抗原而介導機體免疫反應。由于很多腫瘤宿主缺乏功能性DC而不能誘發(fā)抗原特異性

2、T細胞免疫應答，故如何在體外誘導功能性DC用于主動免疫治療，具有重要臨床意義。研究報道，F(xiàn)LT3配體(FLT3-L)作為一種細胞因子，可以成功誘導成熟DC的生長，并且誘導漿細胞樣DC的生長，增加DC的數(shù)量，增強DC的特異性。作為經(jīng)典的DC誘導刺激因子，GM-CSF在DC培養(yǎng)中的作用已得到肯定。本研究旨在探討相同劑量的FLT3-L和GM-CSF在誘導成熟DC的體外培養(yǎng)過程中的作用，以及不同的DC-CIK共培養(yǎng)方式誘導的成熟CIK的特異性免

3、疫表型表達以及對腫瘤細胞殺傷活性的差異，從而為臨床DC-CIK治療提供參考。 方法： 實驗的第一部分：細胞取自正常人外周血單個核細胞。使用FLT3-L誘導DC成熟組作為實驗組，GM-CSF誘導DC成熟組作為對照組，分離外周血貼壁細胞培養(yǎng)DC，隔日添加細胞因子，并按計劃分別于培養(yǎng)過程中行流式細胞學檢查分析不同的細胞因子誘導DC的免疫表型的差異。 實驗的第二部分：細胞來源有兩種：EBV感染所致的噬血細胞綜合癥患者的外

4、周血單個核細胞、AML-M4緩解期患者的外周血單個核細胞。EBV感染噬血細胞綜合癥患者DC培養(yǎng)過程中加入EBV抗原肽后與CIK共培養(yǎng)，比較是否可以培養(yǎng)出克隆性增強的CIK，從而提高CIK的抗瘤活性。AML-M4緩解期患者分別使用FLT3-L/GM-CSF兩種細胞因子誘導培養(yǎng)成熟DC，同時培養(yǎng)CIK細胞，待DC培養(yǎng)成熟后加入CIK，進行DC-CIK共培養(yǎng)。培養(yǎng)前后DC分別進行細胞計數(shù)、行流式細胞學檢查；培養(yǎng)前后CIK分別進行細胞計數(shù)、流式

5、細胞學檢查、基因掃描圖譜分析、殺傷實驗。通過一系列的實驗分析，選擇DC-CIK的最佳培養(yǎng)方案。 結(jié)論： 1.通過實驗摸索，我們用縮短培養(yǎng)時間的14天DC-CIK共培養(yǎng)方法，成功培養(yǎng)出樹突狀細胞和細胞因子誘導的殺傷細胞，建立并優(yōu)化了DC-CIK的培養(yǎng)體系。 2.對EB病毒感染相關性噬血細胞綜合征患者進行CIK治療是可行的，可以作為臨床輔助治療方式，在DC的培養(yǎng)過程中加入EB病毒相關的抗原肽可以刺激T淋巴細胞產(chǎn)生克隆