紋帶棒狀桿菌為主的棒狀桿菌耐藥性及其耐藥機制探討.pdf

1、目的：探討臨床分離的類白喉棒狀桿菌對常用抗生素的耐藥性及其耐藥機制。
　　 方法：對石家莊和邢臺地區(qū)臨床分離的26株類白喉棒狀桿菌采用CLSI（臨床實驗室標準化研究所）推薦的瓊脂稀釋法對10種常用藥物（頭孢唑啉、頭孢呋辛酯、萬古霉素、替考拉寧、紅霉素、四環(huán)素、米諾環(huán)素、氧氟沙星、克林霉素、鏈霉素）進行了最低抑菌濃度(MIC)檢測，同時采用聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)法檢測26株類白喉棒狀桿菌的總DNA中的5'CSⅠ類整合酶基因(int

2、I)及可變區(qū)，確定細菌攜帶Ⅰ類整合子的情況。同時檢測紅霉素耐藥基因ermA、ermB、ermC、ermX、mefA/E及轉(zhuǎn)座子Tn1545整合酶intTn，并探討其與耐藥的關(guān)系。
　　 結(jié)果：結(jié)果顯示，26株類白喉棒狀桿菌中，20株對頭孢唑啉不敏感，17株對頭孢呋辛酯不敏感。所測全部對糖肽類抗生素（萬古霉素和替考拉寧）敏感。對紅霉素和克林霉素呈現(xiàn)高度耐藥（MIC＞512μg/ml），分別只有2株和3株敏感。對四環(huán)素類（四環(huán)素和米

3、諾環(huán)素）均只有9株敏感，其余17株不敏感菌株MIC值大部分大于128μg/ml。對于氟喹諾酮類（氧氟沙星）MIC值大部分在64-128μg/ml之間，僅7株敏感。鏈霉素的MIC值大部分在64-512μg/ml之間，僅8株敏感。對總DNA中的5'CSⅠ類整合酶基因(intI)進行擴增，發(fā)現(xiàn)15株整合酶陽性，繼而對其可變區(qū)進行擴增，有5株陽性，擴增出長度為1010bp的條帶。應(yīng)用BLAST在NCBI上進行比對，確定其攜帶了aadA2基因盒(

4、GenBank:FJ855127)?；蚝薪閷?dǎo)對鏈霉素耐藥。對紅霉素耐藥基因進行檢測時，發(fā)現(xiàn)26株有10株含有ermX基因(擴增片段為390bp，GenBank：AM748802.1)，3株含有ermA基因（擴增片段為618bp，GenBank：FN435325.1），15株含有ermB基因（擴增片段為610bp，GenBank：EU168327.1）。13株含有轉(zhuǎn)座子Tn1545整合酶intTn（擴增片段為1062bp，GenBank

5、：X61025.1）。26株棒狀桿菌中均沒有檢測到ermC和mefA/E。實驗菌株中有4株未檢測到任何erm基因，其中2株對克林霉素敏感而對紅霉素耐藥（M耐藥）。實驗結(jié)果表明，介導(dǎo)類白喉棒狀桿菌對紅霉素耐藥的主要機制是由于作用靶位發(fā)生改變，由erm基因介導(dǎo)的核糖體甲基化修飾。26株類白喉棒狀桿菌對紅霉素耐藥大部分都屬于結(jié)構(gòu)型耐藥。通過對erm基因的研究同時發(fā)現(xiàn)，本實驗菌株中其中占主要地位的是ermB，其次是ermX。ermX是一類棒狀桿

6、菌屬特有的能夠介導(dǎo)棒狀桿菌對大環(huán)內(nèi)酯類抗生素耐藥的基因。ermB基因位于Tn917、Tn1545或類似的結(jié)合型、非結(jié)合型轉(zhuǎn)座子內(nèi)，或由質(zhì)粒攜帶，能在細菌間廣泛傳播，對此，我們進一步檢測了轉(zhuǎn)座子Tn1545整合酶intTn，發(fā)現(xiàn)本實驗中轉(zhuǎn)座子整合酶陽性的菌株與ermB陽性的菌株符合率達到86.67％，這也證實了ermB基因由Tn1545攜帶，通過接合型轉(zhuǎn)座子Tn1545在種屬間傳播。
　　 結(jié)論：26株類白喉棒狀桿菌攜帶多種erm