膿毒癥大鼠急性肺損傷及其防治機制的研究.pdf

1、第一部分 NF-кB與PLA2在脂多糖致大鼠急性肺損傷中的作用機制 目的：研究脂多糖（Lipopolysaccharide，LPS）所致急性肺損傷（Acute lung injury，ALI）的病理過程，探討NF-кB與PLA2在LPS所致ALI中的作用機制。 方法：SD雄性大鼠隨機分為對照組、模型組。靜脈注射LPS（6mg/kg）復(fù)制ALI的動物模型。對照組靜脈注射等公斤體重的生理鹽水。每組各分為注射后2小時、4小時、

2、8小時、12小時四個亞組，每組8只大鼠。分別于各時間點麻醉后活殺，取肺組織測定肺濕/干重比，石蠟包埋切片HE染色行肺組織病理評分，肺泡支氣管灌洗提取肺泡巨噬細胞（Alveolar macrophages，AM）中性紅法測定吞噬功能、TUNEL法檢測凋亡率及免疫組化法檢測核因子-к Bp65蛋白（Nuclear factor-к Bp65，NF-к Bp65）表達，逆轉(zhuǎn)錄-多聚酶鏈反應(yīng)（Reverse transcription-poly

3、merase chain reaction，RT-PCR）法檢測 AM的分泌型磷脂酶A2ⅡA型（Secretory phospholipase A2 typeⅡA，sPLA2ⅡA）、Bcl2、Bax mRNA的轉(zhuǎn)錄表達。 結(jié)果：與對照組各對應(yīng)時間點相比，模型組肺干/濕比、肺組織病理評分、AM的NF-к Bp65表達及凋亡、AM的sPLA2ⅡA基因表達增加（P<0.01），AM吞噬功能、Bcl2、Bax基因的表達下降（P<0.01

4、）。 結(jié)論： 1.采用尾靜脈注射LPS方法可成功地復(fù)制大鼠急性肺損傷模型。此方法操作簡單、易行、結(jié)果穩(wěn)定。 2.注射LPS后，呈時間依賴性地促進AM sPLA2ⅡA基因表達、NF-кB活化及AM的凋亡，肺損傷程度亦隨之加重，提示LPS致ALI與AM的NF-кB活化、sPLA2ⅡA基因表達、AM的凋亡相關(guān)。 第二部分氯喹及PDTC防治膿毒癥大鼠急性肺損傷的作用機制 目的：研究脂多糖（LPS）所致急性

5、肺損傷（ALI）的病理生理過程，探討氯喹及吡咯烷二硫代氨基甲酸鹽（PDTC）對LPS所致ALI的保護性作用機制。 方法：SD雄性大鼠隨機分為對照組、模型組、氯喹干預(yù)組、PDTC預(yù)防組。靜脈注射LPS（6mg/kg）復(fù)制ALI的動物模型。氯喹干預(yù)組是在注射LPS后立即予以氯喹（30mg/kg）腹腔注射，PDTC預(yù)防組是在注射LPS前30min予以PDTC（120mg/kg）腹腔注射，對照組靜脈注射等公斤體重的生理鹽水。測定肺濕/干

6、重比，肺組織病理評分，肺泡巨噬細胞（AM）凋亡率及核因子-кBp65（NF-кBp65）表達，并檢測AM的sPLA2ⅡA、Bcl2、Bax基因的表達。 結(jié)果：與對照組相比，模型組肺干/濕比、肺組織病理評分、AM的NF-к Bp65表達及凋亡、AM的sPLA2ⅡA基因表達增加（P<0.05），AM Bcl2、Bax基因的表達下降（P<0.05）。與模型組相比，氯喹干預(yù)組和PDTC預(yù)防組上述改變得以逆轉(zhuǎn)，肺損傷程度明顯減輕（P<0.