p53-HDM2相互作用的非肽小分子抑制劑syl-155對(duì)腫瘤細(xì)胞的毒性作用.pdf

1、p53 是一個(gè)強(qiáng)力抗腫瘤活性的抑癌蛋白。在許多人類腫瘤， p53被失活，有多種機(jī)制參與失活p53。其中一個(gè)機(jī)制是癌蛋白MDM2（在人為HDM2）與之結(jié)合，并將其降解。在p53和MDM2蛋白之間形成一個(gè)負(fù)反饋調(diào)節(jié)環(huán)。5％-10％的人類腫瘤中HDM2蛋白過表達(dá)使p53失活。通過抑制腫瘤細(xì)胞中p53與MDM2的相互作用進(jìn)而激活p53蛋白功能已成為尋找癌癥藥物治療的熱點(diǎn)。已有多個(gè)研究從不同的方面證實(shí)了這種方法的可行性，這些研究包括：顯微注射單克

2、隆抗體，反義寡核苷酸轉(zhuǎn)染，表達(dá)p53肽類似物或融合蛋白，以及微生物提取物等。然而，除反義寡核苷酸外，它們都是肽類或大分子物質(zhì)，成本較高，不利于新藥開發(fā)和應(yīng)用。因而，發(fā)展非肽類小分子MDM2拮抗劑就成為一個(gè)方向。 基于p53-HDM2蛋白復(fù)合物晶體結(jié)構(gòu)的闡明，我們與醫(yī)科院藥物所尹大力教授合作，利用計(jì)算機(jī)輔助模型設(shè)計(jì)并用化學(xué)方法合成了一系列非肽小分子的HDM2抑制劑，我室已畢業(yè)的趙劍華博士采用ELISA方法評(píng)價(jià)了它們與MDM2的親和

3、性，其中一部分能從p53與MDM2的相互作用中釋放p53，誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡。本研究評(píng)價(jià)了趙劍華博士尚未研究的非肽類小分子的HDM2抑制劑。采用MTT法，獲得它們?cè)?種不同腫瘤細(xì)胞的IC50，以IC50<10mg/mL作為篩查標(biāo)準(zhǔn)，最后確定syl-155進(jìn)一步研究。采用MTT法、蛋白印跡和流式細(xì)胞分析檢測(cè)了syl-155對(duì)三種不同p53狀態(tài)腫瘤細(xì)胞的影響：KYSE510（人食管鱗癌細(xì)胞系）（突變型p53）、HT1080（人纖維肉瘤細(xì)胞系）