薈萃分析：生物標(biāo)記物在預(yù)測上皮性卵巢癌化療反應(yīng)性中的作用及成纖維細(xì)胞在卵巢癌順鉑耐藥中的作用.pdf

1、本文分三個(gè)部分進(jìn)行探討：
　　第一部分:薈萃分析：生物標(biāo)記物在預(yù)測上皮性卵巢癌化療反應(yīng)性中的作用
　　目的：一些生物標(biāo)記物的異常表達(dá)可能用來預(yù)測上皮性卵巢癌（EOC）患者的化療反應(yīng)性。然而，現(xiàn)有的文獻(xiàn)資料還沒有定論。故本薈萃分析是為了更精確和客觀地評(píng)估它們?cè)谏掀ば月殉舶┗颊呋煼磻?yīng)性中的作用。
　　方法：通過PubMed和EMBASE這兩個(gè)數(shù)據(jù)庫搜索文獻(xiàn)，研究內(nèi)容為B淋巴細(xì)胞瘤-2基因（Bcl-2），人類表皮生長因子受

2、體（EGFR），谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶（GST），低密度脂蛋白受體相關(guān)蛋白（LRP），抑癌基因P16，抑癌基因P21，P-糖蛋白（P-gp）及腫瘤壞死因子-α（TNF-α）表達(dá)狀態(tài)與EOC患者鉑類化療反應(yīng)性或預(yù)后的相關(guān)性。用危險(xiǎn)比（RR）來評(píng)估化療反應(yīng)性，風(fēng)險(xiǎn)比（HR）來評(píng)估預(yù)后。根據(jù)納入文獻(xiàn)異質(zhì)性情況，選擇固定效應(yīng)模型或隨機(jī)效應(yīng)模型進(jìn)行薈萃分析。
　　結(jié)果：根據(jù)文獻(xiàn)納入及排除標(biāo)準(zhǔn)，Bc l-2納入了27篇文獻(xiàn)，EGFR納入22篇，G

3、S T納入29篇，LRP納入12篇，p16納入16篇，p21納入22篇，P-gp納入27篇及TNF-α納入3篇。薈萃分析結(jié)果表明，在這些分析的因子中只有LRP，P-gp及 TNF-α表達(dá)狀態(tài)與EOC患者對(duì)鉑類為基礎(chǔ)化療的反應(yīng)性顯著相關(guān)（合并的RR分別為0.904，0.673及1.758）。但對(duì)于 P-gp來說，納入研究可能存在發(fā)表或選擇偏倚（Egger’stest，P=0.029）；而分析LRP及TNF-α的文章數(shù)量太少。p16及P-g

4、p高表達(dá)與EOC患者無進(jìn)展生存期（PFS）差顯著相關(guān)（合并的多因素HR分別為1.550及2.136）；GS T高表達(dá)能改善EOC患者PFS（HR=0.689）；但所有分子標(biāo)記物納入的研究數(shù)量都較少。對(duì)于總生存期（OS），EGFR及P-gp高表達(dá)與EOC患者OS差顯著相關(guān)（HR分別為1.826及1.822）；只有GST高表達(dá)能改善EOC患者OS（HR=0.780）；然而各研究間的異質(zhì)性較顯著。
　　結(jié)論：雖然LRP，P-gp及TNF

5、-α與EOC患者對(duì)鉑類化療的反應(yīng)性相關(guān)；EGFR，GST，P-gp及TNF-α與EOC患者的預(yù)后相關(guān)；但由于納入研究數(shù)量太少，有些研究間存在明顯的異質(zhì)性及發(fā)表偏倚，故暫不推薦用于臨床。
　　第二部分:成纖維細(xì)胞在卵巢癌順鉑耐藥中的作用
　　目的：探討腫瘤相關(guān)成纖維細(xì)胞（CAFs）在卵巢癌順鉑耐藥中的作用及機(jī)制。
　　方法：1.分別從人正常卵巢組織及上皮性卵巢癌組織中原代分離培養(yǎng)正常成纖維細(xì)胞（NFs）和CAFs。

6、>　　2.采用細(xì)胞免疫組化法檢測波形蛋白和細(xì)胞角蛋白8的表達(dá)來鑒定成纖維細(xì)胞的純度，通過檢測α-平滑肌動(dòng)蛋白（α-SMA）的表達(dá)來鑒定NFs和CAFs。
　　3.CAFs/NFs分別與卵巢癌細(xì)胞親本株間接共培養(yǎng)，用于研究成纖維細(xì)胞和癌細(xì)胞之間的相互作用。
　　4. MTT法檢測共培養(yǎng)前后卵巢癌細(xì)胞對(duì)順鉑敏感性的變化。
　　5.流式檢測共培養(yǎng)前后卵巢癌細(xì)胞的凋亡率。
　　6.免疫印跡法檢測共培養(yǎng)前后卵巢癌細(xì)胞內(nèi)凋亡

7、相關(guān)蛋白Caspase-3和Caspase-9的表達(dá)情況。
　　7.無焰原子吸收光譜儀檢測共培養(yǎng)前后卵巢癌細(xì)胞內(nèi)鉑的蓄積變化。
　　8.實(shí)時(shí)定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（Real-time PCR）及免疫印跡法檢測共培養(yǎng)前后卵巢癌細(xì)胞內(nèi)果蠅zeste基因增強(qiáng)子同源物2（EZH2）的表達(dá)變化。
　　結(jié)果：1.細(xì)胞免疫組化染色顯示：原代培養(yǎng)的成纖維細(xì)胞內(nèi)波形蛋白表達(dá)陽性，細(xì)胞角蛋白8表達(dá)陰性；α-SMA在CAFs內(nèi)陽性表達(dá)，而在NF

8、s內(nèi)則陰性表達(dá)。
　　2.與空白對(duì)照組及 NFs組相比，CAFs顯著性降低卵巢癌細(xì)胞對(duì)順鉑的敏感性（P<0.05）。
　　3.與空白對(duì)照組相比，經(jīng)CAFs共培養(yǎng)后的卵巢癌親本細(xì)胞株SKOV3，A2780及ES2的細(xì)胞凋亡率分別降低至28.0％，29.1％及33.8％，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.001）；而NFs并未顯著性降低上述卵巢癌細(xì)胞的凋亡率。
　　4. CAFs組的卵巢癌細(xì)胞株中順鉑所致細(xì)胞凋亡明顯減弱，凋亡執(zhí)行

9、分子 Caspase-3和Caspase-9蛋白的活化片段表達(dá)量顯著性降低。
　　5.與空白對(duì)照組相比，CAFs顯著性降低鉑在卵巢癌細(xì)胞內(nèi)的蓄積（P<0.001）；而NFs則不能。
　　6.與NFs組及空白對(duì)照組相比，CAFs顯著提高卵巢癌細(xì)胞內(nèi)EZH2 mRNA及蛋白水平（P<0.001）。
　　結(jié)論：我們的研究表明，CAFs參與上皮性卵巢癌順鉑耐藥的形成。CAFs上調(diào)上皮性卵巢癌中原癌基因E ZH2的表達(dá)可能是其參