紅色諾卡氏菌發(fā)酵條件優(yōu)化及N-CWS提取工藝的改進研究.pdf

1、目前,腫瘤及許多疾病已成為威脅人類健康的重大隱患。有研究表明,紅色諾卡氏菌細胞壁骨架中的提取物具有調(diào)節(jié)機體免疫的功能,能增強T細胞、巨噬細胞、NK細胞的活性,對于人體淋巴細胞則具有致有絲分裂原活性,并能誘導機體產(chǎn)生干擾素。通過多年的實驗及臨床研究證明它具有抗腫瘤作用,并能抗細菌、病毒的感染。在臨床治療腫瘤及婦科相關(guān)疾病上有很好的療效。如今關(guān)于N-CWS的研究大多著重于臨床上針對其對癌癥、炎癥的抑制作用進行嘗試,而關(guān)于紅色諾卡氏菌的培養(yǎng)條

2、件優(yōu)化的研究還停留在較低水平。
　　 本研究通過對培養(yǎng)基中的碳源、氮源、無機鹽離子、培養(yǎng)基pH值、搖床速度、培養(yǎng)溫度、溶氧和接種量等因素進行了優(yōu)化,通過一系列實驗得出較為適合紅色諾卡氏菌生長繁殖的培養(yǎng)方式,當培養(yǎng)條件為葡萄糖/酵母膏培養(yǎng)基,pH7-8,26℃搖床培養(yǎng)(320 r/min),50 mL液體培養(yǎng)基接種量在1.5％(0.75 mL)時最為適合。
　　 當前,對于紅色諾卡氏菌的細胞壁破碎有不同的方法,本文比較了超

3、聲波法、自溶法和堿法對Nocardia的破碎情況.試驗結(jié)果表明,這三種細胞壁破碎方法中超聲波法和堿法周期短,效果好;而自溶法周期長效率低,效果不佳。在超聲波破碎法中全程破碎時間和輸出功率是超聲波法破碎的主要影響因素,采用短時多次的破碎方式和質(zhì)量濃度為1.5 g/L的細胞懸浮液有利于細胞的破碎。同時利用正交法對超聲波破壁的條件進行研究,得出在一定菌濃下,用于超聲波破壁的最佳設(shè)置為超聲波時間15s,間隔時間15s,循環(huán)數(shù)40次,功率500W

4、。在自溶法破碎中,自溶時間是主要影響因素,NaCl質(zhì)量分數(shù)為1％、溫度為50℃利于細胞的自溶,經(jīng)過較長時間的處理時間,10％的NaCl及DH9的液體環(huán)境利于自溶。堿液(KOH溶液)濃度為5.5％時最有利于放線菌細胞破壁,破壁時間為30分鐘。
　　 傳統(tǒng)的紅色諾卡氏菌細胞壁骨架(N-CWS)成品檢測中存在某些不足,本實驗通過以下三方面的改進來提升檢測水平。用薄層層析法來代替紙層析法并研究影響層析的一些因素,尋得最佳的層析分離效果,