吡咯列酮對(duì)單腎切除糖尿病大鼠的腎臟保護(hù)作用及其機(jī)制的研究.pdf

1、第一部分 觀察不同劑量的吡咯列酮對(duì)單腎切除糖尿病大鼠的不同作用 背景 噻唑烷二酮類藥物(Thiazolidinediones,TZDs)是一種新型的胰島素增敏劑,目前臨床上主要被用作口服降糖藥物.該研究擬首先系統(tǒng)觀察不同劑量鹽酸吡咯列酮(pioglitazone hydrochloride)對(duì)單腎切除的糖尿病大鼠模型慢性腎臟損害的作用.方法 采用單腎切除的小劑量鏈脲佐菌素(STZ)誘導(dǎo)性糖性病大鼠模型(右側(cè)腎臟切除后2周,靜脈注射35m

2、g/Kg STZ).將大鼠隨機(jī)分為5組,每組6只:單腎切除的對(duì)照組(CTR)、糖尿病非治療組(DM)、3mg/Kg·d吡咯酮治療組(DM-LP)、9mg/Kg·d吡咯列酮治療組(DM-MP)和20mg/Kg·d吡咯列酮治療組(DM-HP).藥物灌胃10周,收集24h尿標(biāo)本,測(cè)定血糖和SBP后處死大鼠,并留取血標(biāo)本和腎臟組織.檢測(cè)指標(biāo)包括:血清胰島素水平和血糖、血清甘油三酯(TG)和總膽固醇(CHO)、內(nèi)生肌酐清除率(Ccr)、動(dòng)脈收縮壓

3、(SBP)、24h尿蛋白定量和相對(duì)腎重(左腎重/體重,LK/BW),并應(yīng)用PAS染色檢測(cè)腎小球細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)的沉積情況.第二部分 探討小劑量吡咯列酮非代謝性腎臟保護(hù)作用的可能機(jī)制 背景 在這一部分的研究中,我們擬研究和探討吡咯列酮非代謝性腎臟保護(hù)作用的機(jī)制.方法 單腎切除糖尿病大鼠模型的建立方法同第一部分.將大鼠隨機(jī)分為以下4組,每組6只:單腎切除的對(duì)照組(CTR)、3mg/kg/d吡咯列酮治療的對(duì)照組(CTR-LP)、糖尿病非治

4、療組(DM)、3mg/kg/d吡咯列酮治療的糖尿病組(DM-LP).給藥10周后,檢測(cè)大鼠的血清胰島素水平、血糖、血清TG和TCHO,以及SBP、24h尿蛋白定量和LK/BW;分別采用Northern Blot和RT-PCR檢測(cè)腎皮質(zhì)中TGF-β1、TIMP-1、c-fos、c-jun和PPARγ下游特異靶基因脂肪細(xì)胞-脂肪酸結(jié)合蛋白(A-FABP)的mRNA水平;并采用Western Blot檢測(cè)腎皮質(zhì)中PAI-1、PPARγ和磷酸化

5、的細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶(p-ERK)的蛋白表達(dá)量,以及蛋白激酶C(PKC)-βI從胞漿向胞膜的轉(zhuǎn)位;同時(shí)還應(yīng)用凝膠滯后實(shí)驗(yàn)(EMSA)檢測(cè)腎皮質(zhì)組織核蛋白提取物中PPARγ與過氧化物酶體增殖物反應(yīng)元件(PPRE)的結(jié)合活性,用以反映PPARγ的轉(zhuǎn)錄活性.第三部分 吡咯列酮和氯沙坦對(duì)糖尿病大鼠腎臟損害的作用及機(jī)制的比較研究 背景 在這一部分實(shí)驗(yàn)中，我們擬觀察在相似降壓作用的前提下，吡咯列酮和1型血管緊張素Ⅱ受體拮抗劑氯沙坦（Losartan

6、）對(duì)DM大鼠腎臟損害的影響有何不同，并從細(xì)胞信號(hào)的角度探討這兩種藥物發(fā)揮作用的機(jī)制的異同.方法 單腎切除的糖尿病大鼠模型的建立方法同前.將大鼠隨機(jī)分為4組，每組6只：?jiǎn)文I切除的對(duì)照組（CTR）、糖尿病非治療組（DM）、20mg/kg·d吡咯列酮治療組（DM-HP）和50mg/kg·d Losartan治療組（DM-Los）.藥物灌胃10周，收集24h尿標(biāo)本，測(cè)定血糖和SBP后處死大鼠，并留取血標(biāo)本和腎臟組織.檢測(cè)指標(biāo)包括：普通生化指標(biāo)（

7、同前）、腎皮質(zhì)組織中AngⅡ水平、LK/BW;分別應(yīng)用PAS和IHC檢測(cè)腎臟組織切片中腎小球中ECM的沉積程度和1型血管緊張素Ⅱ受體（AT1）的表達(dá)情況;應(yīng)用Western Blot分別檢測(cè)腎臟皮質(zhì)中AT1、PPARγ和p-ERK的蛋白表達(dá)量，以及腎臟皮質(zhì)中PKCβI的轉(zhuǎn)位情況;應(yīng)用EMSA檢測(cè)腎臟皮質(zhì)中PPARγ的轉(zhuǎn)錄活性.第四部分 觀察波生坦和依那普利對(duì)糖尿病大鼠腎臟中PPARγ途徑的作用 背景 探討糖尿病狀態(tài)下腎臟中PPARγ途徑

8、的變化，以及此時(shí)應(yīng)用內(nèi)皮素受體拮抗劑波生坦（Bosentan）和血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制劑依那普利（Enalapril）對(duì)該途徑的影響.方法 單腎切除糖尿病大鼠模型的建立方法同前.將大鼠隨機(jī)分為5組，每組6只：?jiǎn)文I切除的對(duì)照組（CTR）、糖尿病非治療組（DM）、100mg/Kg·d波生坦治療組（DM-B）、10mg/Kg·d依那普利治療組（DM-E）和兩藥合用組（DM-BE），劑量同上.藥物灌胃20周，收集24h尿標(biāo)本，測(cè)定血糖和平均動(dòng)脈壓