鮮切生菜中沙門氏菌的生長預(yù)測及滲透抗逆境應(yīng)答基因rpoS對沙門氏菌的影響.pdf

1、沙門氏菌是一種分布廣泛的食源性致病菌，嚴(yán)重影響著人們的健康和國民經(jīng)濟(jì)的發(fā)展。為了控制其危害，本文選用已經(jīng)全基因測序的模式菌株Salmonellaenterica serovar Typhimurium SL1344，及本研究構(gòu)建的rpoS基因缺失的SL1344菌株SL1344/ΔrpoS，和分離自食品中的野生菌株LQG-1進(jìn)行微生物應(yīng)急生長調(diào)控的研究。
　　首先對SL1344進(jìn)行馴化，使其能夠在只有葡萄糖能夠提供碳源的BMM培養(yǎng)基

2、中穩(wěn)定生長;并將已馴化的SL1344菌株進(jìn)行周期性高滲刺激，探究沙門氏菌延滯期的變化情況;接著以SL1344為原始菌株，采用λred同源重組技術(shù)構(gòu)建逆境應(yīng)答相關(guān)基因rpoS基因缺失的沙門氏菌菌株SL1344/ΔrpoS。同時，以并從生鮮豬肉中分離得到沙門氏菌野生菌株LQG-1為研究對象，對其進(jìn)行鑒定，并將SL1344、SL1344/ΔrpoS及LQG-1的生長在逆境中進(jìn)行比較，探究rpoS在滲透應(yīng)答中在轉(zhuǎn)錄層面的調(diào)控方式和變化，說明在鮮

3、肉與鮮切生菜交叉感染沙門氏菌后，rpoS對生長動力學(xué)參數(shù)的影響作用。
　　為說明環(huán)境周期性變化對微生物適應(yīng)力的影響，對SL1344進(jìn)行研究。結(jié)果表明(1)經(jīng)馴化的SL1344連續(xù)3～4次傳代，當(dāng)初始菌量相同時，其達(dá)到穩(wěn)定期時菌量的數(shù)量級也相同，說明SL1344能夠在只有葡萄糖提供碳源的BMM培養(yǎng)基中穩(wěn)定生長;(2)已馴化好的菌株SL1344在NaCl濃度為3％、3.5％、4％和5％的BMM中培養(yǎng)，根據(jù)其延滯期初始下降幅度及生長周期

4、長短的比較結(jié)果，確定適宜的NaCl的添加濃度為3.5％;(3)已馴化且未經(jīng)滲透處理的SL1344在含3.5％NaCl、0％NaCl的BMM中周期性交替的培養(yǎng)，并觀察其在BMM-NaCl中的生長情況，結(jié)果發(fā)現(xiàn)SL1344首次在BMM-NaCl中培養(yǎng)，即為第0次轉(zhuǎn)移，其延滯期初始下降幅度最大，生長至穩(wěn)定期所需時間最長。隨著轉(zhuǎn)移次數(shù)的增多，延滯期的初始下降幅度越來越小，到第4次轉(zhuǎn)移時幾乎為零。
　　為研究逆境應(yīng)答基因rpoS對實際食品中

5、沙門氏菌生長的影響情況，通過λred同源重組技術(shù)，構(gòu)建SL1344/ΔrpoS;從實際食品生鮮豬肉中分離得到LQG-1，并對其進(jìn)行鑒定。結(jié)果顯示:(1)構(gòu)建SL1344/ΔrpoS菌株過程中，用同一對引物鑒定，rpoS基因PCR擴(kuò)增產(chǎn)物片段、替換后擴(kuò)增片段及消除后擴(kuò)增片段分別為1344bp、1432bp、500bp左右，證明rpoS基因缺失菌株SL1344/ΔrpoS構(gòu)建成功;(2)對LQG-1進(jìn)行鑒定，其菌體短桿狀、無芽孢、革蘭氏染色

6、呈陰性，經(jīng)16SrDNA序列進(jìn)行分析，確定其為沙門氏菌。
　　為探索rpoS基因與實際食品中沙門氏菌生長的影響，將SL1344、SL1344/ΔrpoS和LQG-1分別接種于LB肉湯、含NaCl3.5％的BMM以及鮮切生菜上，以Baranyi建立得到其一級模型，擬合得到其生長動力學(xué)相關(guān)參數(shù)，比較延滯期和最大比生長速率，可以得知:(1) LB液體培養(yǎng)基中，三菌株生長基本同步;(2)在含3.5％NaCl的BMM中，SL1344比SL1