食品中沙門(mén)氏菌分子檢測(cè)靶點(diǎn)的篩選與評(píng)價(jià).pdf

1、沙門(mén)氏菌是自然界普遍存在的一種食源性致病菌，在世界各地的食物中毒中，沙門(mén)氏菌引起的中毒病例占第一位或第二位。常見(jiàn)的肉類(lèi)食品和奶蛋類(lèi)食品都可以被沙門(mén)氏菌污染。隨著農(nóng)業(yè)與食品工業(yè)的迅速發(fā)展，尋找一種可靠、快速且國(guó)際通用的食源性致病菌的檢測(cè)方法就顯得尤為重要了。 目前，國(guó)內(nèi)外大多仍采用傳統(tǒng)的培養(yǎng)方法來(lái)檢測(cè)沙門(mén)氏菌，操作復(fù)雜且所需時(shí)間長(zhǎng)，一般為4～7天，遠(yuǎn)遠(yuǎn)不能滿(mǎn)足當(dāng)今食品檢測(cè)的需要，而基于聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）的檢測(cè)方法由于具備快速

2、、靈敏、準(zhǔn)確的特點(diǎn)，廣泛應(yīng)用于沙門(mén)氏菌的檢測(cè)。PCR檢測(cè)方法的特異性與靈敏度主要取決于相應(yīng)檢測(cè)靶點(diǎn)的選擇。 目前，沙門(mén)氏菌PCR 方法所用的檢測(cè)靶點(diǎn)，大多數(shù)是國(guó)外學(xué)者在2000年前發(fā)掘的，主要是以毒力基因?yàn)橹鳌ｋS著生物信息學(xué)技術(shù)的發(fā)展和基因測(cè)序工作的完善，特別是有5 株沙門(mén)氏菌基因組序列測(cè)定工作已完成并被收集在GenBank中，為新檢測(cè)靶點(diǎn)的篩選提供了生物信息。 本研究利用BLAST程序比較沙門(mén)氏菌屬內(nèi)基因組DNA序列的

3、同源性以及沙門(mén)氏菌與非沙門(mén)氏菌基因組DNA序列之間的特異性，發(fā)掘出檢測(cè)沙門(mén)氏菌屬的特異性片段。從中隨機(jī)挑選出15個(gè)片段作為候選靶點(diǎn)，一共設(shè)計(jì)了27對(duì)引物（FS1～FS27），對(duì)它們的特異性、靈敏度加以評(píng)價(jià)，最終篩選出檢測(cè)性能較好的引物FS23與FS21。 采用引物FS23對(duì)供試菌株的相應(yīng)檢測(cè)靶點(diǎn)進(jìn)行PCR擴(kuò)增，44株沙門(mén)氏菌都能擴(kuò)增到一條492bp 特異性片段，而22株非沙門(mén)氏菌則不能擴(kuò)增出這一特異性片段。采用引物FS21 對(duì)供

4、試菌株的相應(yīng)檢測(cè)靶點(diǎn)進(jìn)行PCR擴(kuò)增，44株沙門(mén)氏菌都能擴(kuò)增到一條522bp特異性片段，而22株非沙門(mén)氏菌則不能擴(kuò)增出這一特異性片段。 以FS23為引物建立PCR 方法檢測(cè)豬霍亂沙門(mén)氏菌基因組DNA的靈敏度為11.9fg/μL，細(xì)菌純培養(yǎng)物靈敏度為4.9×102 cfu/mL。以FS21為引物建立PCR方法檢測(cè)豬霍亂沙門(mén)氏菌基因組DNA的靈敏度為119fg/μL，細(xì)菌純培養(yǎng)物靈敏度為4.9×103cfu/mL。 用豬霍亂沙