黃油中異油酸和CLA的檢測(cè)與富集方法研究.pdf

1、許多研究者在尋找一些可能性來增加乳脂的價(jià)值時(shí)都強(qiáng)調(diào)一些天然存在于乳脂中的脂肪酸對(duì)健康的益處。其中包括，共軛亞油酸(conjugated linoleic acid， CLA)已經(jīng)顯示出具有的健康好處，例如減少的癌癥的發(fā)病率和動(dòng)脈粥樣硬化，以及控制體重和有助于骨頭的形成。另一種與健康促進(jìn)和疾病預(yù)防相關(guān)的重要脂肪酸是異油酸（vaccenic acid，t11-C18:1），其為共軛亞油酸的代謝前體。雖然在天然乳脂中發(fā)現(xiàn)的這些反式脂肪酸與健康

2、益處積極相關(guān)，但在人造黃油氫化生產(chǎn)過程中形成的反式脂肪酸已被證明有負(fù)面影響，增加心臟疾病的風(fēng)險(xiǎn)?；谶@種認(rèn)識(shí)，本文試圖建立方法，達(dá)到分析和富集異油酸和CLA的目的，為進(jìn)一步進(jìn)行功能研究提供基礎(chǔ)和思路。
　　為分析測(cè)定牛奶和黃油中異油酸的含量，建立了毛細(xì)管電泳分析異油酸的方法。優(yōu)化后的電泳條件為：緩沖液含4％（w/v）β-CD、54 mmol·L-1 SDS、80 mmol·L-1硼酸鹽（pH9.0）、8 mol·L-1尿素和4%（

3、v/v）甲醇，電泳電壓為25 kV、毛細(xì)管柱溫為15℃。該方法測(cè)定異油酸在100～2500μg·mL-1范圍內(nèi)的線性關(guān)系良好（R2=0.9817），檢出限（LOD）為10μg·mL-1，平均加標(biāo)回收率為95.6%。通過該方法測(cè)得市售牛奶中異油酸的含量為11.25 mg·g-1乳脂，c9,t11-CLA含量為9.86 mg·g-1乳脂。黃油中異油酸的含量為7.54 mg·g-1脂肪，c9,t11-CLA的含量為9.92 mg·g-1乳脂。

4、該方法不僅可以準(zhǔn)確測(cè)定牛奶和黃油中的異油酸，而且可以同時(shí)檢測(cè)牛奶和黃油中的主要共軛亞油酸異構(gòu)體。
　　制備高純度共軛亞油酸和異油酸是研究和開發(fā)的前提。通過水解黃油得到游離脂肪酸，然后通過尿素包合結(jié)晶分離出不同的脂肪酸成分。研究了尿素包合過程中回流時(shí)間、包合時(shí)間、包合溫度、尿素與溶劑配比等主要條件與純化得到的CLA和異油酸純度和得率的關(guān)系。結(jié)果表明，尿素與溶劑配比是影響兩者純度和得率的主要因素。當(dāng)混合脂肪酸:尿素:乙醇為1:3:9(