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文檔簡介
1、基質金屬蛋白酶(MMP)因其在腫瘤的生長、轉移和血管生成等多個環(huán)節(jié)中發(fā)揮著重要作用而成為腫瘤治療研究中引人注目的靶點。Ⅳ型膠原酶作為MMPs家族中的重要成員之一,可以通過降解Ⅳ型膠原等膠原底物破壞基底膜和細胞外基質的完整性,從而有利于腫瘤的生長、轉移和血管生成。一般來說,在腫瘤細胞及其鄰近的間質組織中,Ⅳ型膠原酶的表達和活化顯著增加,并且這種增加與腫瘤的惡性表型呈正相關。以其為分子靶點,發(fā)展的多種小分子Ⅳ型膠原酶抑制劑在惡性腫瘤的治療中
2、顯示出確切的療效。本論文利用兩種Ⅳ型膠原酶抑制劑篩選模型尋找活性天然產物及化合物。從活性微生物發(fā)酵液中分離得到了兩個大分子多糖。對篩選得到的喹諾酮類化合物進行了體外腫瘤細胞增殖和侵襲轉移的抑制活性評價。 第一部分間接ELISA法Ⅳ型膠原酶抑制劑篩選模型的應用及熒光底物法Ⅳ型膠原酶抑制劑篩選模型的建立 根據(jù)競爭性抑制單抗3D6與Ⅳ型膠原酶結合的化合物可能具有Ⅳ型膠原酶抑制活性的假設,采用間接ELISA的方法建立了Ⅳ型膠原酶
3、抑制劑的高通量篩選模型。在使用間接ELISA法在大量的微生物產物和化合物中篩選Ⅳ型膠原酶抑制劑的過程中,發(fā)現(xiàn)該模型與明膠酶譜檢測之間缺乏很好的平行性。為此,建立了熒光底物法的Ⅳ型膠原酶抑制劑篩選模型。該模型機理是,MMP對小肽底物的水解解除了Dnp對Try熒光核的熒光淬滅作用,熒光值的變化反映了MMP酶解能力的強弱,從而可以定量評價樣品對MMP酶活性的抑制能力。對該模型的反應條件進行了優(yōu)化,使之符合高通量篩選的要求。利用熒光底物模型對在
4、幾個間接ELISA法模型上的陽性化合物和多糖進行了活性評價和比較,結果顯示與明膠酶譜檢測的平行性較好,初步證明了模型的有效性。 第二部分H25抑制HT1080細胞增殖和侵襲轉移活性的體外評價及抗侵襲作用機理的初步探討 喹諾酮類化合物H25是從間接ELISA法Ⅳ型膠原酶抑制劑篩選模型中篩選得到的,在熒光底物法模型中也表現(xiàn)出很好的活性,明膠酶譜檢測證明其有競爭性抑制Ⅳ型膠原酶的作用。本論文中,多方面評價了H25的體外抗腫瘤細
5、胞增殖和侵襲轉移的活性,并探討了其抗侵襲作用可能的機理。 實驗結果證明,H25對腫瘤細胞有一定的增長抑制作用,并具有明顯的抗腫瘤侵襲轉移的作用。進一步的實驗發(fā)現(xiàn)H25可能是在轉錄后水平實現(xiàn)對細胞MMP-2和9的抑制。其明確的作用靶點尚有待更深入的研究。 第三部分微生物多糖1519A和3748A的分離 1519A和3748A,是從真菌1519和3748發(fā)酵液中分離得到的大分子多糖。它們是通過間接ELISA法Ⅳ型膠原
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