靶向性阻斷STAT3信號通路增加乳腺癌化療敏感性的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:探討STAT3信號通路特異性阻斷AG490聯(lián)合化療增加乳腺癌細(xì)胞株化療敏感性的實(shí)驗(yàn)研究,并觀察AG490對細(xì)胞凋亡抑制蛋白survivin表達(dá)的影響。
　　 方法:
　　 (1)實(shí)驗(yàn)分組:①對照組:只加DMEM培養(yǎng)液;②AG490處理組:加入含濃度10μmol/L,20μmol/L,40μmol/L,80μmol/L,160μmol/L的培養(yǎng)液;③ADM處理組:加入含濃度0.005μg/ml、0.05μg/ml、0

2、.5μg/ml、5μg/ml、50μg/ml的培養(yǎng)液;④聯(lián)合處理組。
　　 (2)通過四甲基偶氮唑藍(lán)(MTT)比色法觀察AG490,ADM單藥及聯(lián)合用藥對細(xì)胞增殖活力的影響,計(jì)算細(xì)胞生長抑制率和半數(shù)抑制濃度(IC50)。
　　 (3)采用流式細(xì)胞儀(FCM)檢測各實(shí)驗(yàn)組乳腺癌MDA-MB-231細(xì)胞株72h的凋亡率,以及細(xì)胞周期的分布。
　　 (4)應(yīng)用免疫細(xì)胞化學(xué)(ICC)染色技術(shù)觀察各實(shí)驗(yàn)組survivin蛋

3、白的表達(dá)情況。實(shí)驗(yàn)對照組除加入同等濃度的DMSO外,均不加任何干擾因素。
　　 結(jié)果:
　　 (1)MTT觀察到隨著作用濃度的增加和作用時(shí)間的延長,AG490對MDA-MB-231細(xì)胞的抑制作用也隨著增強(qiáng)。隨著ADM作用濃度的增加,藥物對MDA-MB-231細(xì)胞的生長抑率也隨著升高。與ADM組相比,AG490+ADM組使MDA-MB-231細(xì)胞抑制率上升更明顯(P＜0.05)。單藥組ADM的IC50值為:3.30μg/m

4、l;AG490+ADM組作用后ADM的IC50為0.67μg/ml:ADM和AG490聯(lián)合與單用ADM相比較,ADM的敏感性提高4.93倍,各項(xiàng)聯(lián)合用藥效果q值＞1。
　　 (2)流式細(xì)胞術(shù)檢測結(jié)果顯示,AG490使MDA-MB-231細(xì)胞細(xì)胞周期阻滯在G1期。AG490組、ADM組、AG490+ADM組的凋亡百分?jǐn)?shù)均高于對照組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);AG490+ADM組作用于MDA-MB-231細(xì)胞72h后的凋亡百

5、分?jǐn)?shù)為20.76±2.73％,顯著高于ADM組,其細(xì)胞凋亡百分比為10.35±2.66％,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　 (3)免疫組化顯示AG490組、AG490+ADM組作用72h后,MDA-MB-231細(xì)胞中Survivin蛋白表達(dá)量明顯低于對照組和ADM組,結(jié)果有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)。
　　 結(jié)論:
　　 1.AG490抑制人乳腺癌MDA-MB-231細(xì)胞株的增殖,促進(jìn)細(xì)胞凋亡。