11010.篩選并鑒定果蠅jumeau相互作用的蛋白質

1、學校代碼：10225學號：S14554學位論文篩選并鑒定果蠅Jumeau相互作用的蛋白質指導教師姓名：申請學位級別：論文提交日期：授予學位單位：張晴金麗華教授碩士2014年4月東北林業(yè)大學東北林業(yè)大學學科專業(yè)：遺傳學論文答辯日期：2014年6月授予學位日期：答辯委員會主席：論文評閱人：春ac4t匕q摘要摘要果蠅作為一種典型的模式生物，在昆蟲和人類的天然免疫研究中一直占有重要的地位?，F今，許多關于天然免疫的研究結果都是從對果蠅的研究中發(fā)現

2、的。果蠅Schneider2(s2)細胞株來自黑腹果蠅培養(yǎng)末期的胚胎，其許多特征顯示與果蠅巨噬細胞類似。果蠅S2細胞的培養(yǎng)簡單、高效，且同時具有哺乳動物表達系統(tǒng)和昆蟲表達系統(tǒng)二者的優(yōu)良特征，是一個高效率的表達系統(tǒng)。Jumeau(Jumu)蛋白是果蠅體內的一個重要的轉錄因子，編碼719個氨基酸，是首個被發(fā)現的具有雙重功能的FKH／WH家族蛋白，能引起異染色質的大規(guī)模修飾。但是目前Jumu蛋白在果蠅天然免疫中的作用及轉錄調控機制還不十分明確

3、。本實驗以LGiot及KCtGuruharsha等人的研究結果一果蠅Jumu蛋白與Cos、CG5375及L(1)SC之間存在潛在的蛋白相互作用一為基礎。通過構建以GFP蛋白為標簽的重組質粒，制備高效率的GFP多克降抗體，利用果蠅S2細胞系蛋白表達系統(tǒng)，蛋白免疫共沉淀技術來驗證Cos、CG5375及L(1)sc與Jumu的相互作用。結果顯示，果蠅Jumll蛋白與Cos、CG5375及L(1)sc蛋白之間不存在相互作用。為此，我們通過轉染空

4、載體pMK33一Flag作為陰性對照和pMK33FlagJumufulllength重組質粒到果蠅S2細胞中并篩選穩(wěn)定的細胞表達體系，利用蛋白免疫共沉淀技術結合雙向電泳實驗篩選與Jurau蛋白相互作用的蛋白。通過相關軟件對雙向電泳凝膠圖像分析，共篩選出7個差異蛋白，其相對分予量分別為141KDa，82KDa，69KDa，44KDa，38KDa，27KDa和26KDa。根據以上篩選結果，我們對這些差異樣品點進行摳點處理并消化，迸行質譜分析